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caralinda79
Nuovo Arrivato

Città: firenze


21 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2007 : 15:17:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di caralinda79 Invia a caralinda79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti! Vi sottopongo il seguente quesito: ho estratto il DNA da una gelatina con un kit apposito che prevede la digestione con proteinasi K, una endonucleasi che taglia in modo aspecifico. Dopo la purificazione la lettura allo spettrofotometro mi da una concentrazione del DNA di 30 ng/microL, ma il rapporto 260/280 è 0,7. La PCR non viene.
Potrebbe essere dovuto a un eccesso di proteine che interferiscono con la taq?
Che faccio?
Pensavo di purificare ulteriormente con le colonnine che si usano per purificare il DNA da PCR..

HELP!

Gabriele
Utente

Prov.: Pisa
Città: Pisa


615 Messaggi

Inserito il - 05 luglio 2007 : 01:20:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gabriele Invia a Gabriele un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Quel rapporto è assolutamente insufficiente,cerca di ottenere almeno un rapporto di 1,7.Meglio se arrivi a 2.

"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe."
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caralinda79
Nuovo Arrivato

Città: firenze


21 Messaggi

Inserito il - 05 luglio 2007 : 09:28:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di caralinda79 Invia a caralinda79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Lo so che il rapporto ottimale è tra 1.8 e 2. Volevo sapere come faccio ad ottenerlo in questo caso specifico.
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Balsamo del Canadà
Nuovo Arrivato

E. coli

Prov.: Verbano-Cusio-Ossola
Città: Verbania


97 Messaggi

Inserito il - 05 luglio 2007 : 10:10:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Balsamo del Canadà Invia a Balsamo del Canadà un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao Caralinda, per me dovresti usare le colonnine. In tutte le mie purificazioni anche se avevo concentrazioni inferiori a 10ng/ml le PCR venivano comunque. Quindi è probabilmente dovuto a quelle contaminazioni. Quelle che usavo io erano uno dei vari kit "NucleoSpin" della Macherey-Nagel. Io purificavo prodotti PCR o DNA da gel di agarosio. Dovresti controllare se va bene anche per il tuo materiale di partenza. Ciao Ciao, spero di esserti stato d'aiuto.

-B.del C.-
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caralinda79
Nuovo Arrivato

Città: firenze


21 Messaggi

Inserito il - 05 luglio 2007 : 10:24:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di caralinda79 Invia a caralinda79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
eh già, a me vengono pcr meravigliose anche con 1 ng di dna in 30 microlitri di reazione..
ora provo!
grazie
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