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lamp
Nuovo Arrivato



13 Messaggi

Inserito il - 05 luglio 2007 : 16:37:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lamp Invia a lamp un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti, ho un problemino da risolvere. da poco mi Ŕ stato assegnato un nuovo progetto in lab su un argomento in cui dal punto di vista pratico sono quasi bianca. devo disegnare dei primers sia per RT-PCR che per la real time pcr per l'alfasinucleina e altre proteine coinvolte sul morbo di parkinsons...qualc'uno di voi mi sa dare delle dritte e una sorta di schema su come procedere?
grazie confido in voi

lamp
Nuovo Arrivato



13 Messaggi

Inserito il - 05 luglio 2007 : 18:17:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lamp Invia a lamp un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
scusa ma dove devo proseguire?
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chick80
Moderatore

DNA

CittÓ: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 05 luglio 2007 : 22:58:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
questo thread va bene per proseguire. Atreliu diceva di non scrivere lo stesso messaggio in due sezioni diverse perchŔ poi si fa confusione (uno ti risponde di qui, uno di lÓ e non si capisce pi¨ niente).

Ad ogni modo, c'Ŕ un esempio di come generare primers in questo thread.
L'esempio va bene sia per RT-PCR che per realtime con SYBR Green. Se usi TaqMan allora Ŕ un po' diverso, dimmelo in caso.

http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=1655

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GFPina
Moderatore

GFPina

CittÓ: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 06 luglio 2007 : 01:21:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se invece vuoi vedere se esistono giÓ primers per real time per il tuo gene prova a guardare in questo database: RTPrimerDB
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Aureus
Utente Junior

0613_da_Fil23

Prov.: Forlý-Cesena
CittÓ: Gambettola


123 Messaggi

Inserito il - 06 luglio 2007 : 14:36:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Aureus  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Aureus Invia a Aureus un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Un buon Primer deve avere un'alta specificit├ , ci├▓ significa:
-Alto contenuto in GC 70-80%
-Lunghezza media dai 18-25 bp
-Non fare Primer Dimer
-Non fare hairping formation
-Avere una specificit├ unica nel templato

Queste sono le linee base per un buon primer, pi├╣ ├Ę lungo il primer e pi├╣ c'├Ę la probabilit├ di hairping.
Oligo ├Ę un buon programma, sia per simulazioni di PCR, ma anche per la costruzione dei primer.
Per PCR: Le temperature di melting di annealing vanno teoricamente aggiustate a seconda del primer
Del resto i primer servono da innesco di replicazione, perci├▓ lo puoi costruire a seconda delle esigenze..
Ciao!

www.tlbspazio.it

Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi
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lamp
Nuovo Arrivato



13 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2007 : 17:39:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lamp Invia a lamp un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie tante, seguir˛ le indicazioni
ciao rosaria
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