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chick80
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Città: Edinburgh
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 Inserito il - 17 luglio 2007 : 00:33:45
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E' una tecnica veramente interessante, che serve per marcare cellule che esprimono (o hanno espresso ad un certo punto della loro esistenza) due determinati geni.
Viene usata ad esempio per il tracing di cellule che derivano da particolari zone dell'embrione.
Innanzitutto ti linko questo articolo:
Cryptic boundaries in roof plate and choroid plexus identified by intersectional gene activation
La situazione è questa:
hai un animale transgenico che esprime Cre recombinasi sotto il promotore del gene A e FLPe ricombinasi sotto il promotore del gene B.
Cre ricombinasi excide il DNA compreso fra due siti detti loxP, mentre FLPe excide il DNA compreso fra due siti FRT.
In questo animale le cellule che esprimono A avranno Cre, quelle che esprimono B avranno FLPe e quelle che esprimono A e B avranno Cre e FLPe.
A questo punto devi inserire un terzo transgene (nota che solo la parte descritta in alto richiede diversi anni di lavoro per generare una linea stabile di doppi transgenici) che sarà fatta così:
--------FRP-STOP-FRP----loxP-GFP--STOP-loxP--PLAP
dove STOP è un codone di stop
GFP è la green fluorescent protein (che è fluorescente in verde)
PLAP è una fosfatasi alcalina che può dare un prodotto colorato (credo in viola)
Hai 4 situazioni:
1) cellula che non esprime nè A nè B. Non viene trascritta nè GFP nè PLAP a causa degli STOP
2) cellula che esprime solo B. Exciderà lo STOP di FRP e produrrà GFP, sarà quindi fluorescente in verde. Non produrrà PLAP perchè non excide lo STOP fra i loxP
3) cellula che esprime solo A. Exciderà GFP-STOP tra i loxP, ma comunque non potrà esprimere PLAP, perchè c'è sempre il primo STOP
4) cellula che esprime A e B exciderà tutta la prima parte del costrutto e produrrà PLAP.
Se A e B sono due geni espressi solo nell'embrione in una certa parte del corpo, puoi prendere un animale adulto e guardare dove ci sono cellule verdi o viola e capire da dove derivano a livello embrionale. |
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