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jenny83
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
 Inserito il - 09 settembre 2007 : 16:52:12
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Volevo un chiarimento: sia gli esperimenti di knock out che quelli di RNAi servono per "eliminare" un specifico gene, ma mettiamo che il gene in questione sia un fattore trascrizionale della maggior parte dei geni della cellula, allora nn posso usare il knock out altrimenti la cellula morirebbe. Perchè invece posso usare l'RNAi, se con qst tecnica vado a silenziare il gene, lui cmq nn effettua la sua funzione...
spero di essere stata chiara e ringrazio in anticipo chi mi chiarirà qst dubbio
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 10 settembre 2007 : 01:13:30
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Per 2 motivi:
1) L'RNAi è solo transiente, quindi puoi silenziare il gene per qualche ora, e la cellula può sopravvivere. Il knockout, invece, è definitivo.
2) Nella maggior parte dei casi con RNAi più che un knock-out fai un knock-down, rimane sempre un poco del mRNA (molto variabile, può essere 1% o 50%, dipende dalla bontà del tuo RNA)
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 16 settembre 2007 : 14:57:39
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Bella ed esauriente risposta quella di chick80,
però dovrei aggiungere un fatto molto importante...
ovvero, il knock-out di un gene, specie in animali transgenici, in genere abbassa notevolmente la vitalità cellulare o dell'intero organismo... quindi mantenere delle colture cellulari con knock-out potrebbe essere difficile poiché le cellule si replicano di meno, potrebbero in alcune casi modificarsi (per es differenziare o tornare ad uno stadio non ben caratterizzato) o peggio morire dopo pochi passaggi.
Come diceva chick80, l'RNA interference permette invece di fare l'esperimento in acuto, ovvero si sceglie un particolare momento della vita cellulare e si spegne il gene, prima o dopo un trattamento, poco dopo le cellule sono lisate, quindi non ti interessa più modificare la vitalità delle cellule perché quelle non trattate stanno in un'altra piastra a replicarsi per altri esperimenti futuri.
Spero di essere stato chiaro 
N.B.: alcuni ricercatori al giorno d'oggi usano alcune strategie interessanti che permettono di avere dei Knock-out parziali o condizionali in vitro senza fare uso di interference, evitando il problema della vitalità etc etc, però sono un po' complicate e si utilizzano solo per particolari esperimenti. |
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