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Discussione |
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Village
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
10 Messaggi |
 Inserito il - 10 ottobre 2007 : 18:15:01
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qualcuno saprebbe darmi qualche dritta in merito a questa tecnica?
modalità d'azione ?
denghiu
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Luca-DNA
Nuovo Arrivato
Prov.: Torino
Città: Torino
68 Messaggi |
Inserito il - 10 ottobre 2007 : 20:03:43
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L'Enhanced ChemiLuminescence (ECL) è una tecnica utilizzata soprattutto per la rivelazione degli anticorpi coniugati con la perossidasi (HRP), che vengono utilizzati come anticorpi secondari nell'analisi con Western Blot.
Praticamente, il complesso enzimatico della perossidasi catalizza la conversione del substrato ECL, creando un reagente sensibile che emette luce (chemiluminescenza). Proprio questa emissione di luce impressiona poi una lastra fotografica, permettendo di "detectare" la presenza della proteina riconosciuta prima dall'anticorpo primario e poi messa in evidenza dall'anticorpo secondario. |
A scientific man ought to have no wishes, no affections, - a mere heart of stone. (C. Darwin) |
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Village
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
10 Messaggi |
Inserito il - 10 ottobre 2007 : 20:26:44
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| grazzie, gentilissimo |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 11 ottobre 2007 : 01:08:41
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Luca-DNA permettimi di fare un'aggiunta alla tua spiegazione:
Citazione:
Messaggio inserito da Luca-DNA
Praticamente, il complesso enzimatico della perossidasi catalizza la conversione del substrato ECL, creando un reagente sensibile che emette luce (chemiluminescenza).
il substrato è il Luminolo che viene ossidato (per aggiunta di H2O2) ad acido 3-aminoftalico ed emette chemioluminescenza.
Le due boccette che ci sono in tutti i kit "ECL" non sono altro che Luminolo e H2O2 |
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Luca-DNA
Nuovo Arrivato
Prov.: Torino
Città: Torino
68 Messaggi |
Inserito il - 11 ottobre 2007 : 01:23:59
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Questo non lo sapevo...ossia sapevo che ci fosse il Luminolo...ma non pensavo che l'altra fosse solo H2O2
Ti ringrazio per la precisazione
Luca |
A scientific man ought to have no wishes, no affections, - a mere heart of stone. (C. Darwin) |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Village
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
10 Messaggi |
Inserito il - 11 ottobre 2007 : 09:10:57
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| lo darò presente nel lab stamattina...vediamo come reagisce la prof |
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gadano
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: roma
22 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2007 : 13:20:16
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| Hey chick sai anche per caso a quale concentrazione sta l'acqua ossigenata? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2007 : 13:42:48
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Da: http://www.bio.net/bionet/mm/methods/1995-May/028086.html
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Stock solns.
a) Luminol stock: Luminol (Sigma) 4mg/ml in DMSO.
b) Enhancer stock: p-iodophenol (Aldrich) 1mg/ml DMSO.
c) Tris Buffer: 100mM Tris.HCl pH7.5
d) H2O2: 3% H2O2
Stock solns a) and b) should be kept in -20deg for <6 months.
Working soln. (Prepare just before use)
a) 0.5ml, b) 0.5ml, c) 2.5ml, d) 25ul, ddw 1.5ml (final 5ml)
This is very cheap, and as sensitive as ECL kit.
Reference: Schneppenheim et al (1991) Electrophoresis 12:367-372.
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