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pelotto74
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 14 ottobre 2007 : 18:10:54
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Salve a tutti, sono nuovo......ho un paio di info da chiedervi.
Lavoro su liquidi seminali umani. E' mia intenzione estrarre RNA dagli spermatozoi.
Indicativamente separerei gli spermatozoi dal resto del liquido (swim up o Percoll) e poi estrarrei l'RNA (Trizol). Le mie domande:
1)qualcuno di voi, ha mai separato zoi dal resto del liquido con percoll?? se si, come vi ci siete trovati?!?! funziona bene come gradiente di separazione?!?
2) userei il trizol per l'RNA. Sul protocollo c'è scritto che lo si può usare su diversi tipi di cellule....gli zoi lo sono....ma anche qui: qualcuno lo ha mai fatto?!??
Leggo la letteratura in cerca di qualche spunto e ovviamente ce ne sono, ma in alcuni caso usano Kit o quant'altro...e il nostro lab, in fatto di soldi è molto restio.
Grazie a tutti per qualsiasi suggerimento o risposta!
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Avogadra
Nuovo Arrivato
33 Messaggi |
Inserito il - 09 luglio 2008 : 20:16:29
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| Gli spermatozoi hanno l Rna? |
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frau_frosch
Utente Junior
Città: Boston
225 Messaggi |
Inserito il - 09 luglio 2008 : 22:06:04
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Certo che hanno RNA! Comunque... premettendo che non mi sono mai occupata direttamente del problema... provo a rispondere.
Io ho effettuato solo swim up ma alla fine il principio è sempre lo stesso: isolare spermatozoi capacitati..per cui il gradiente di Percoll, che funziona in base alla densità, mi sembra un buon metodo per eliminare il plasma seminale. Tanto più che l'ho trovato in diverse pubblicazioni che si occupavano di estrazione di RNA.
Per il Trizol,credo ugualmente che vada bene, anche se non ho trovato nulla a riguardo. però posso dirti che facendomi un giro su pubmed sembra che molti usino anche il metodo guanidina isotiocianato+cloruro di cesio (Chirgwin et al, 1999).
Ho trovato un articolo la cui sezione "materiali e metodi" magari può esserti utile:
http://molehr.oxfordjournals.org/cgi/content/full/6/2/127#CHIRGWIN-ETAL-1979
Mi spiace non poterti aiutare più di così!
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Avogadra
Nuovo Arrivato
33 Messaggi |
Inserito il - 09 luglio 2008 : 23:22:31
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| A cosa serve L'rna nello spermatozoo maturo, se nn devono sintetizzate le proteine? |
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Avogadra
Nuovo Arrivato
33 Messaggi |
Inserito il - 10 luglio 2008 : 11:07:23
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cioè dico...hanno nel nucleo anche Rna-POlimerasi, e Dna-Polimerasi...ma non le perdono durante la spermioistogenesi?
anche anche i ribosomi?? |
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Avogadra
Nuovo Arrivato
33 Messaggi |
Inserito il - 10 luglio 2008 : 11:56:12
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----quello che mi chiedevo era se il fatto che uno spermatozoo maturo non duplica e non trascrive fosse dovuto non solo alla condensazione del Dna ma anche alla perdita della polimerasi per la duplicazione e per la trascrizione.
cioè neanche se DEcondensassimo la cromatina si riprenderebbero questo processi, ipoteticamente? |
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RNA da spermatozoi
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