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Endelig
Nuovo Arrivato


Città: Roma


4 Messaggi

Inserito il - 19 ottobre 2007 : 12:07:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Endelig Invia a Endelig un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti devo fare unb western blot in cui voglio vedere la fosforilazione delle mapk e avevo pensato di usare il ripa buffer per estrarre le proteine. Secondo voi va bene? qualcuno potrebbe darmi un protocollo abbastanza dettagliato per il RIPA?
Ciao Mario

Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 19 ottobre 2007 : 12:11:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
io ho usato il RIPA sulle Caco-2 e ho sono riuscita ad estrarre una buona quantità di ptroteine. Il protocollo era:
Tris HCl 50mM pH 7.4
NaCl 150mM
EDTA 1mM pH 8
Na-deossicolato 0.25%
NP-40 1%
a questo poi aggiungevo all'uso i vari inibitori delle proteasi.
però, poichè poi ho cominciato a lavorare su proteine integrali di membrana ho preferito cambiare il buffer di lisi ed usarne uno più forte. Cosa devi vedere? erk?

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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