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pico
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 12 novembre 2007 : 22:31:15
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Ciao sn una new entry!!!
qualcuno potrebbe dirmi a cosa serve inserire myc nel vettore di espressione
Una seconda domanda dopo la purificazione plasmidica con mini prep cosa segue
Grazie
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Luca-DNA
Nuovo Arrivato
Prov.: Torino
Città: Torino
68 Messaggi |
Inserito il - 12 novembre 2007 : 23:18:53
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Dopo le mini-prep devi digerirle in modo da essere sicuro che i plasmidi che hai purificato siano quelli che desideravi!
Dopo, puoi trasformare i batteri con le mini positive per farti le maxi-prep per avere più DNA da utilizzare!!!
Poi dipende sempre da cosa devi fare con questi plasmidi... |
A scientific man ought to have no wishes, no affections, - a mere heart of stone. (C. Darwin) |
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darkene
Utente Junior
291 Messaggi |
Inserito il - 12 novembre 2007 : 23:27:57
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secondo me hai le idee un po' confuse. Allora:
un vettore d'espressione è un plasmide che ha tutte le caratteristiche di un plasmide (es. resistenza ad un antibiotico...) e un promotore. inserendo un qualsiasi gene a valle del promotore e trasfettando il costrutto ottenuto in cellule, puoi avere una iperespressione di quel gene in modo da poterlo studiare in vario modo. Myc è uno dei più studiati oncogeni che (come gli altri geni) può essere clonato in un vettore d'espressione. quindi sei tu a decidere il gene che vuoi esprimere, e myc è una possibilità, (in poche parole myc non è, in linea generale, un componente base dei vettori).
per quanto riguarda la mini-prep, immagino ti riferisca al clonaggio. questa ti permette di individuare il clone positivo, cioè di tuo interesse. il prodotto della mini viene di solito prima corso così com'è su un gel di agarosio con a fianco il vettore di partenza per vedere quale clone ha il peso aspettato (se distinguibile dal vuoto), poi i "positivi" vengono sottoposti a digestione per restrizione (ad esempio con gli enzimi utilizzati nel clonaggio) per verificare l'avvenuta inserzione del gene, ed infine puoi sequenziarlo per essere sicuro al 100%. |
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RM
Nuovo Arrivato
115 Messaggi |
Inserito il - 13 novembre 2007 : 22:04:46
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Ciao
Myc si usa nei vettori d'epressione come "tag";se cloni un gene nuovo, del quale ad es. non hai un anticorpo e vuoi verificarne l'espressione (o la localizzazione intracellulare) in genere lo si inserisce in particolari vettori d'espressione come fusione ad una parte della sequenza di myc. In tal modo puoi fare un WB con un anticorpo anti-Myc-tag. Poichè la ns. proteina di interesse sarà fusa a myc, potrai vedere anche la sua espressione o localizzazione
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pico
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 14 novembre 2007 : 19:31:12
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grazie Rm
spiegazione molto chiara |
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vettore
Didattica
