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coccinellas
Utente Junior

scienziato pazzo
Cittā: l'isola che non c'č


138 Messaggi

Inserito il - 08 dicembre 2007 : 10:52:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di coccinellas Invia a coccinellas un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Come saggiate le proteine?
Io da almeno due anni utilizzo la metodica con Biorad,tuttavia ultimamente mi sono trovato a dover comparare i miei risultati ottenuti in piante superiori con campioni di alghe unicellulari,ma in questo caso l'estatto a contatto con il Biorad forma un sacco di grumi e chiaramente la lettura spettrofotometrica viene malissimo.
Sapete spiegarmi il perchč e magari consigliarmi un altro metodo per la lettura dele proteine?

Marco De Giorgi
Nuovo Arrivato

Prov.: Lecce
Cittā: Monteroni di Lecce


55 Messaggi

Inserito il - 08 dicembre 2007 : 13:05:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Marco De Giorgi Invia a Marco De Giorgi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Il metodo biorad (Blue di Coomassie in ambiente acido) ha delle limitazioni:
1)il reattivo lega gli amminoacidi basici;
2)non tutte le proteine sono solubili in ambiente acido.
Forse č per uno di questi motivi che non funziona.
Potresti provare con il metodo di Lowry,utilizzando come reattivo il Folin di Cioacalteau,che si lega ai gruppi fenolici dei residui di tirosina dando una colorazione rosso porpora che assorbe a 660nm;in alternativa il metodo del biureto,utilizzando appunto il biureto come reattivo,in cui gli ioni Cu++ si complessano alle proteine dando una colorazione rosso porpora che assorbe a 540nm.La limitazione di quest'ultimo č che č poco sensibile: 1mg/mL.Altri non ne so perchč ho studiato solo questi.
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