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isi
Nuovo Arrivato
Città: italy
25 Messaggi |
 Inserito il - 10 dicembre 2007 : 15:28:02
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Ciao a tutti!!
avevo bisogno di capire una cosa fondamentale...se qualcona ha tempo per spiegarmelo! che differenza c'è tra ELISA e western blot? nella mia ignoranza mi era sembrato che in entrambi i casi si ottenessero informazioni sulla concentrazione di una certa proteina di interesse...
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Arf
Nuovo Arrivato
31 Messaggi |
Inserito il - 10 dicembre 2007 : 16:13:38
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Ciao isi, in realtà il western io lo uso più come saggio qualitativo che quantitativo, cioè mi dice se in un pool di proteine di un estratto c'è o meno la mia, se si trova all'altezza che mi aspetto, e quindi indicazioni sulla sua eventuale degradazione, mentre l'intensità del segnale, anche al netto di artefatti nell'esposizione, può solo dare una indicazione della quantità di proteina, ed in fine il Western comporta la denaturazione della proteina quindi c'è o non c'è, ma se per qualche motivo non fosse ben foldata (i prioni sono proteine endogene con un folding sbagliato) non te ne accorgeresti, e se ci fosse una mutazione che ne cambia la conformazione e quindi l'attività? non è detto che l'anticorpo discrimini, soprattutto se usi un primario policlonale(es anemia a cellule falciformi 1 solo aminoacido mutato nella catena dell'emoglobina=altezza identica e segnale identico a meno di non usare un monoclonale altamente specifico). L' ELISA invece l'ho usato più per scopi quantitativi, a volte su estratti crudi o cmq poco trattati, quindi anche proteine non denaturate; con il sandwich e diversi ab posso valutare diverse caratteristiche sullo stesso pool (ci sono ab che discriminano tra forme fosforilate o meno), in oltre con l'ELISA puoi valutare la presenza di ab in un siero che riconoscano epitopi formati da aa non adiacenti ed anche separarli(di nuovo la struttura tridimensionale della proteina) e puoi addirittura immobilizzare cellule che esprimano sulla superficie un determinato recettore o struttura antigenica (es un linfocita B che esprima un ab che riconosca uno specifico epitopo).
Questo è quello che sò in merito, spero di esserti stato utile.
Ciao! |
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ilarip
Utente Junior
Prov.: Bologna
Città: Bologna
432 Messaggi |
Inserito il - 10 dicembre 2007 : 16:22:39
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ciao allora la differenza tra il test di ELISA e il westem blot è sostanzialmente che mentre nel yest di elisa si sfrutta la relazione antigene/anrivorpo infatti serve per verificare la presenza du un determinato antigene mentre nel W.B.invece serve per riconoscere da una miscela di proteine una determinata proteina in basa all riconoscimento di anticorpi
cmq guarda qui che vedrai che ti sembrerà più chiaro...
http://it.wikipedia.org/wiki/ELISA
http://it.wikipedia.org/wiki/Western_blot
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Ho imparato.. .che le opportunità non vanno mai perse.
Quelle che lasci andare tu...le prende qualcun altro
Ho imparato...che è meglio dare consigli solo in due circostanze...
Quando sono richiesti e quando ne dipende la vita.
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isi
Nuovo Arrivato
Città: italy
25 Messaggi |
Inserito il - 18 dicembre 2007 : 11:07:36
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grazie....ma qlo che non mi è ancora chiaro è qsto...in laboratorio (stage) stiamo facendo alcuni elisa per vedere se in sieri di pazienti è possibile riconoscere una determinata proteina. nei sieri che danno risposta positiva e solo in qli poi facciamo western blot? perche se gia sappiamo che la proteina c'è? scusate ma in laboratorio nessuno mi VEDE,,,,
grazie mille a voi!!!! |
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Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: teramo
100 Messaggi |
Inserito il - 22 dicembre 2007 : 15:39:31
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| ciao..allora la differenza tra wb ed elisa è essenzialmente una: nell'elisa sia substrato che prodotto dell'enzima sono solubili mentre nella wb il substrato DEVE essere insolubile (es la DAB) x rilevare la proteina infatti nella wb viene legato un'enzima all'Ab II ed a seconda della sua attività si misura la quantità di Ag...penso poi che l'elisa si fà x vedere semplicemente se il nostro Ag c'è o no mentre con la wb possiamo misurarne la quantità...spero di esserti stato di auto...ciao... |
Davide* |
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alexct82
Nuovo Arrivato
Prov.: ct
Città: catania
26 Messaggi |
Inserito il - 23 dicembre 2007 : 13:27:21
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Citazione:
Messaggio inserito da isi
grazie....ma qlo che non mi è ancora chiaro è qsto...in laboratorio (stage) stiamo facendo alcuni elisa per vedere se in sieri di pazienti è possibile riconoscere una determinata proteina. nei sieri che danno risposta positiva e solo in qli poi facciamo western blot? perche se gia sappiamo che la proteina c'è? scusate ma in laboratorio nessuno mi VEDE,,,,
grazie mille a voi!!!!
Ciao!
io ho avuto un'esperienza simile alla tua e nel mio caso facevano saggi di sieropositività all'HIV. anche li facevano prima l'ELISA per vedere se c'erano nel paziente anticorpi anti-HIV.in caso di risposta dubbia facevano il WB su siero di paziente per vedere se c'erano le proteine dell'HIV (gp120, Tat ecc.).in caso di risp dubbia facevano la PCR per vedere se c'era il genoma virale.
L'elisa è meno sensibile e più economica del WB.Il WB a sua volta è meno sensibile e più economico della PCR. Credo la differenza sia tutta qsta... |
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ELISA-WESTERN
Didattica e Relazioni
