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alexct82
Nuovo Arrivato
Prov.: ct
Cittā: catania
26 Messaggi |
 Inserito il - 19 dicembre 2007 : 15:46:10
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Ciao a tutti.
Devo trasfettare delle cellule e sto usando come terreno Opti-Mem della invitrogen, senza siero. Posso mettere Penicilina/Streptomicina all' 1% o inibisce la trasfezione o fa male alle cellule?
Grazie a chiunque mi risponderā.
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Eleo
Nuovo Arrivato
Prov.: Pavia
89 Messaggi |
 Inserito il - 19 dicembre 2007 : 22:54:41
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| quando facevo trasfezioni transienti diluivo l'agente trasfettante in terreno senza nulla e lo lasciavo almeno mezza giornata, poi lo aspiravo e mettevo il terreno di coltura che utilizzavo normalmente. |
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alexct82
Nuovo Arrivato
Prov.: ct
Cittā: catania
26 Messaggi |
Inserito il - 20 dicembre 2007 : 17:05:02
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| l'ho fatto anche io ma ho trovato tutte le cellule morte dopo 48h dalla trasfez, anche nel controllo senza agente trasfettante.forse c'č stato inquinamento (le wells sn un po sporche) o il terreno non contiene abbastanza nutrienti..la linea che utilizzo č SK-N-BE(2).. |
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Dionysos
Moderatore
Cittā: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 21 dicembre 2007 : 20:05:49
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La contaminazione microbiologica č facile da identificare (ad es. il terreno si intorbidisce)
quindi di che inquinamento 'sporco' parli? sicuro che non sia solo precipitato salino?
La penicillina/streptomicina di solito nell'Optimem non la metto, anche perchč il mio
DMEM di normale coltura (che sostituisco all'Optimem solo dopo 6 h dalla transfezione)
contiene giā entrambi questi antibiotici, per cui mi pare inutile per sole sei ore.
Se le cellule muoiono, controlla altri parametri vitali: CO2, acqua nell'incubatore,
in particolare quest'ultima, che se č troppo poca possono verificarsi casi di
evaporazione della componente acquosa del terreno, iperconcentrazione dei sali
del terreno e tanti saluti alle celluline. Usa un controllo di cellule senza
nč DNA nč agente transfettante e guarda che succede. |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontā e della libertā
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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alexct82
Nuovo Arrivato
Prov.: ct
Cittā: catania
26 Messaggi |
Inserito il - 23 dicembre 2007 : 13:20:56
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Grazie Dyonisos..
credo si tratti di inquinamento micotico e si č verificato anche nel controllo senza DNA o agente trasfettante!!!quale antibiotico mi consigli?io sto provando la trasfezione inversa, cioč semino con l'optimem e l' agente trasf e dopo 24h sostituisco con terreno normale (Mem e Ham's F12 1:1)hai esperienza di trasfezione su linee di neuroblastoma?sono difficili da trasfettare? |
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terreno per trasfezione
Didattica e Relazioni
