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Discussione

amfidea
Nuovo Arrivato

Prov.: Pavia

15 Messaggi

Inserito il - 28 dicembre 2007 : 16:43:03

Ciao, sono nei casini perch� devo fare una tesina e non sono abile ad usare gli strumenti informatici, mi dareste una mano per favore? Devo estrapolare la sequenza di interesse e digerirla con gli enzimi di restrizione. HELP ME PLEASE!!!

Studiare una strategia per

- amplificare il gene codificante per l'enzima alanine dehydrogenase di Mycobacterium tuberculosis a partire da DNA genomico

- sottoclonare il suddetto gene in un vettore d'espressione tale per cui la proteina ricombinante corrispondente espressa in E. coli sia dotata di His-tag N-terminale

Suggerire inoltre un protocollo di purificazione all'omogeneit� della proteina ricombinante ed un saggio per verificarne l'attivit� enzimatica (qui � necessario che si legga almeno un articolo sulla caratterizzazione biochimica dell'enzima).

Per recuperare la sequenza amminoacidica dal sito www.ncbi.nlm.nih.gov, le ricordo di selezionare "protein" nel menu a scomparsa dopo la scritta "search" prima di inserire il nome della proteina d'interesse nella finestra a fianco. Una volta entrata nel file cerchi la scritta "CDS" che corrisponde alla sequenza di DNA codificante la proteina, necessaria per il disegno dei primer e per l'analisi di restrizione virtuale (che pu� fare al sito http://tools.neb.com/NEBcutter2/index.php) .

Per recuperare le sequenze di un vettore del tipo suddetto (serie pET expression vector) le consiglio di consultare la lista di quelli disponibili al sito http://www.emdbiosciences.com/html/NVG/pETTable.html