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ariel14
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
 Inserito il - 11 gennaio 2008 : 10:51:56
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ciao ragazzi,qualcuno potrebbe spiegarmi in cosa consiste (in termini molti semplici)la pcr?
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GFPina
Moderatore
Cittā: Milano
8408 Messaggi |
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ariel14
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 13 gennaio 2008 : 12:08:28
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| scusate raga,sto facendo la pcr,ma ho un dubbio:la fase di annealing e' la fase che permette l'appaiamento primers- dna ,e la temperatura ottimale dipende dalle coppie di basi presenti nel primers e dalla lunghezza dei primers ..pero' la temp di solito e' attorno ai 55-60 gradi.se le basi presenti nei primers sono gc allora la temp sara' di 4 gradi invece se le basi sono at la temp e' attorno ai 2 gradi,quindi la temperatura di anneling deve essere inferiore alla temp di melting:temperatura nella quale il dna e' denaturato per il 50%,perche' considerimo proprio la tp di melting? |
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ariel14
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 13 gennaio 2008 : 12:33:19
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| perche' giustamente se le due eliche nn si separano nn possiamo appaiare i primers,poi? |
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GFPina
Moderatore
Cittā: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 13 gennaio 2008 : 18:14:23
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Non so se ho capito bene la domanda... provo a rispondere:
Allora prima hai una Denaturazione attorno ai 95°C, in cui si la separazione delle due eliche di DNA.
Poi si abbassa la temperatura a circa 56-60°C e hai l'Annealing: i primers si attaccano al DNA. A questa temperatura ovviamente il DNA non si č rinaturato altrimenti non si potrebbero attaccare i primers.
Per scegliere la Temperatura di Annealing si calcola la T di melting dei primers e poi si utilizza una temperatura di 2-5°C inferiore, in modo che i primers si leghino. Se scegli una temperatura troppo elevata rischi che i primers non si leghino bene e diminuisce l'efficienza (hai meno amplificato!), se invece la T annealing č troppo bassa rischi che i primers si leghino in modo aspecifico in altri punti del DNA e potresti avere dei prodotti aspecifici!
Spero di aver risposto alla tua domanda! 
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ariel14
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 14 gennaio 2008 : 13:36:32
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ok,grazie penso di aver capito
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antoniocordaro
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Cittā: palermo
2 Messaggi |
Inserito il - 31 gennaio 2008 : 11:01:46
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Citazione:
Messaggio inserito da ariel14
ok,grazie penso di aver capito
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PCR
Didattica e Relazioni
