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 slot blot e ibridazione whole mount
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daisy
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108 Messaggi

Inserito il - 16 gennaio 2008 : 14:19:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di daisy Invia a daisy un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti scusate se vi disturbo ma avrei da porvi due questioni . Non saprei come definire in una spiegazione sentitica , ma allo stesso tempo puntuale la tecnica di Slot blot. So solo che viene utilizzata nei casi di ibridazione su membrana ed è utili sia per gli analisi di mRNA espressi sia di DNA. Ma com'è il procedimento?( chick 80 ho già guardato in protocolii ma non capisco molto della spiegazione data). Il mio secondo dubbio consiste nella definizione whole mount. Io la definirei come tecnica di ibridazione che a differenza della FISH riguarda l'intero tessuto embrionale e non solo una sezione istologica. Una sonda di digossigenina che ibridizza con uno specifico mRNA viene riconosciuta da fosfatasi alcalina, che defosforilata porta a una precipitazione della soluzione(che aquisisce un colore viola-porpora) , e visualizza solo le regioni dove è localizzato l'mRNA bersaglio. Scusate... ripensandoci avrei un altro piccolo dubbio posso definire il trasferimento di DNa su filtro nel Southern blot come tecnica di trasferimento pasivo , dove l'acqua risale in superficie trascinando ac. nucleici e proteine in soluzione verso i fogli assorbenti applicati sopra il filtro su gel e nel passaggio solo glia ac. nucleici sono intrappolati su filtro di nitrocellulosa? E' così o no? Mi potete chiarire questi dubbi please? sono assai disperata e triste. sono uggiosa come il clima di oggi pomeriggio!!! grazie per le risposte di certo numeroso merci

e@daisy
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