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marina1983
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18 Messaggi

Inserito il - 16 gennaio 2008 : 20:28:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di marina1983 Invia a marina1983 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti.
ho trasformato e.coli con un vettore di clonazione codificante per una proteina di fusione (proteina fusa con His tag)
dopo avere indotto l'espressione con IPTG ho estratto la frazione proteica totale e poi ho fatto il western blot, utilizzando come anticorpo primario His•Tag Monoclonal Antibody.
il problema č che oltre a rilevare la proteina che mi interessa, ne rilevo molte altre. qualcuno puo dirmi perchč, perfavore?
come faccio a purificare solo la mia proteina con la tecnica cromatografia di affinitā su metallo chelato, se ci sono molte alte proteine con his tag nella frazione proteica totale?
grazie


Utente Junior



565 Messaggi

Inserito il - 19 gennaio 2008 : 19:58:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lā Invia a lā un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao! Non ti devi preoccupare. Io purifico proteine con tag di istidina, e il western alle volte mi mostra anche altre bande. Immagino tu conosca il peso molecolare della tua proteina, quindi potresti fare una dialisi per eliminare un po' delle proteine che disturbani, oppure fare una purificazione usando una colonna scambio ionico.
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