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Autore Discussione  

pdm
Nuovo Arrivato

Prov.: Palermo
Città: palermo


3 Messaggi

Inserito il - 24 gennaio 2008 : 10:14:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di pdm Invia a pdm un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho un problema , non riesco a clonare un frammento di 2500bp circa; potreste indicarmi un vettore dentro cui posso inserire tale frammento senza grandi difficoltà??Anche dei vettori di espressione :::grazie!!!!!!!!!!!!!!!!

Piera Di Maggio

darkene
Utente Junior

occhi



291 Messaggi

Inserito il - 24 gennaio 2008 : 10:24:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di darkene Invia a darkene un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
pcDNA3
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pdm
Nuovo Arrivato

Prov.: Palermo
Città: palermo


3 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2008 : 11:40:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di pdm Invia a pdm un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
più che altro mi servirebbe un vettore di espressione dentro cui clonare il frammento di 2500bp circa in modo da mandarlo a sequenziare e farlo esprimere in cellule ospiti opportuni.
Grazie

Piera Di Maggio
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Archimedes
Nuovo Arrivato


Città: Boston, MA


20 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2008 : 12:00:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Archimedes  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Archimedes Invia a Archimedes un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
pBR322 ? fino alle 6000 bp è anche abbastanza maneggevole...
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Neuroscience
Utente



659 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2008 : 14:32:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Neuroscience Invia a Neuroscience un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Archimedes

pBR322 ? fino alle 6000 bp è anche abbastanza maneggevole...



meglio pcDNA3.1, pCEFL, oppure pBS con un promotore eucariotico e un poliA.
Se cerchi su internet ne trovi diversi commerciali e non

Se, invece, queste 2500bp derivano da una PCR potresti utilizzare il Topo cloning per clonarlo con alta efficienza.

il pBR322 è meglio usarlo in casi estremi poiché ha un'origine di replicazione debole e si amplifica con minore efficienza. Certo che può clonare "frammenti" fino a 23.000 basi, ma per un microframmento di 2500 i vettori classici sono più performanti.

x pdm: Fatti aiutare materialmente da un esperto in clonaggi, poiché anche piccoli errori che sembrano niente a chi inizia danno risultati completamente completamente diversi.

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