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Autore

Discussione

DocPulciBiotek
Nuovo Arrivato

Prov.: Milano
Citt�: milano

2 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2008 : 09:57:16

ciao!
chi saprebbe gentilmente spiegarmi xk� la Multiplex Pcr non va a plateau?
grazie anticipatamente!!!

Prima di parlare sii sicuro che le tue parole siano meglio del Silenzio

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2008 : 21:57:21

Hmmmm... forse bisogna chiarire un po' la situazione.

Multiplex significa semplicemente che vai a guardare pi� geni insieme (cio� usi pi� coppie di primers).
C'� poi la differenza fra PCR "classica" e PCR real-time. Nella PCR real-time vai a guardare l'amplificazione al passare del tempo, cio� PRIMA che raggiunga il plateau.

QUALSIASI reazione di PCR se portata avanti per un sufficiente numero di cicli arriva a plateau, semplicemente i risultati che ti d� la realtime sono presi prima di quel momento!

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francesca77
Nuovo Arrivato

Prov.: Milano
Citt�: milano

13 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2008 : 16:37:24

Princilamente la multiplex pu� essere uitlizzata per fare analisi di frammenti o SNaPshot ma, pu� essere anche utile in altri casi?

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2008 : 21:27:57

S�, ad esempio qualsiasi realtime in cui tu voglia avere un controllo interno (es. 18s)

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Luca Beretta
Nuovo Arrivato

Citt�: Milano

12 Messaggi

Inserito il - 12 febbraio 2008 : 10:13:20

Grande chick80!
anche per le PCR vale il discorso del cannibalismo...il pi� forte vince sul pi� debole. C'� competizione tra primers per lo stesso templato. Quindi se lavorate in Real Time, l'endogeno mettetelo primer limited (molti meno primers rispetto al gene target...es 900nM finale di ciascun primer per il target, solo 300nM per l'endogeno... i saggi Housekeeping gi� pronti di Applied almeno funzionano cos�...