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hodla
Nuovo Arrivato

WSV
Prov.: FG
Città: San Giovanni Rotondo


4 Messaggi

Inserito il - 14 febbraio 2008 : 14:57:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di hodla Invia a hodla un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sto cercando di vedere l'espressione di un gene nell'espettorato indotto...il grosso problema però lo trovo allo step 1....cioè tirare fuori un po' di RNA dall'espettorato è praticamente impossibile! Come devo fare?
grazie!
Giulia

Topogigio77
Nuovo Arrivato


Città: Milano


37 Messaggi

Inserito il - 21 febbraio 2008 : 16:50:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Topogigio77 Invia a Topogigio77 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
innanzitutto io metterei il tutto in RNALater per inibire RNase endogene

poi io proverei Tri Reagent + Colonnine (esiste un Kit che si chiama Ribopure, non ricordo di chi sia) per ottenere un RNA il più puro possibile, anche se è poco pazienza, oggigiorno esiste una master mix che ti permette di pre-amplificare il cDNA che ottieni dalle retro-trascrizione in maniera lineare. Si chiama Pre-AMP Master Mix (credo di Applied), basta 1 ng di cDNA e vai dove vuoi.

Hope this helps

Citazione:
Messaggio inserito da hodla

Sto cercando di vedere l'espressione di un gene nell'espettorato indotto...il grosso problema però lo trovo allo step 1....cioè tirare fuori un po' di RNA dall'espettorato è praticamente impossibile! Come devo fare?
grazie!
Giulia

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