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78otan
Nuovo Arrivato

eye
Prov.: Roma
Città: Roma


4 Messaggi
Inserito il - 20 febbraio 2008 : 18:32:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 78otan Invia a 78otan un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti! Mi sono appena iscritto...
l'altro ieri ho fatto lo scritto di ing genetica in cui tra le altre cose si chiedeva quale potrebbe essere un metodo per selezionare dei cloni in cui sia presente una mutazione che abbiamo introdotto.
io farei una ibridazione con una sonda la cui sequenza contenga la mutazione (se questa sonda contiene nei pressi della mutazione qualche mismatch aumenta la sua specificità di legame alla sequenza mutata, no?). Sapreste suggerirmi un controllo efficace per l'esperimento?
grazie

darkene
Utente Junior

occhi



291 Messaggi
Inserito il - 20 febbraio 2008 : 19:04:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di darkene Invia a darkene un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
prima di tutto vedrei se la mutazione crea o distrugge un sito di restrizione (RFLP), quindi farei una PCR e una digestione.
oppure, ma solo se hai lo strumento, puoi fare una DHPLC (più veloce ed economica della digestione).
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78otan
Nuovo Arrivato

eye

Prov.: Roma
Città: Roma


4 Messaggi
Inserito il - 20 febbraio 2008 : 19:31:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 78otan Invia a 78otan un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie!
è veramente una buona soluzione la dhplc.
invece, secondo te, è possibile creare condizioni così stringenti che non permettano assolutamente l'ibridazione tra filamento wt e sonda con mutazione?
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darkene
Utente Junior

occhi



291 Messaggi
Inserito il - 20 febbraio 2008 : 20:14:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di darkene Invia a darkene un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
non saprei, non ho esperienza a riguardo! in teoria penso di si, ma significa perderci molto tempo per settare le condizioni
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78otan
Nuovo Arrivato

eye

Prov.: Roma
Città: Roma


4 Messaggi
Inserito il - 21 febbraio 2008 : 17:59:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 78otan Invia a 78otan un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ok!
...ho appreso che la dhplc (cromatografia liquida ad alta performance denaturante) è una buona tecnica per rilevare questo genere di mutazioni!
ciao e grazie ancora
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