| Autore |
Discussione |
|
|
virgiris
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: pozzuoli
19 Messaggi |
 Inserito il - 26 febbraio 2008 : 20:24:30
|
salve a tutti! sono una nuova iscritta, complimenti per il meraviglioso sito! seguo spesso le vostre discussioni sul forum e non potevo che inscrivermi..sopratutto ora che ho bisogno del vostro aiuto.
allora...ho avuto diversi problemi con una pcr..io eseguo estrazioni da code di topo ma una particolare linea murina mi da problemi.
vagliate tutte le ipotesi, controllati i protocolli, etcetcetc volevo chiedere se è possibile che i primer (specifici naturalmente per tale linea) siano degradati o scaduti.. e se è possibile che primer( non so quando ordinati ) scadino o roba simile !
grazie mille
ps: uso primer della ditta primm se puo servire.
|
|
|
|
|
Gabriele
Utente
Prov.: Pisa
Città: Pisa
615 Messaggi |
Inserito il - 26 febbraio 2008 : 21:11:59
|
| La degradazione è sempre possibile,specialmente se la conservazione non è fatta in condizioni idonee. Tuttavia non mi è mai capitato,quindi la terrei proprio come ultima ipotesi. Potresti provare un'elettroforesi dei primer per vedere se è tutto ok. |
"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe." |
 |
|
|
LUCIA14976
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
Inserito il - 27 febbraio 2008 : 12:33:45
|
per vedere se sono è la degradazione dei primers il problema devi semplicemente rifare la pcr su campioni che già ti hanno dato una buona amplificazione.
è probabile che primers conservati male si degradino, comunque secondo me il problema sono le differenze individuali (mutazioni di singoli necleotidi) che ci sono tra diversi campioni. Può succedere che individui diversi portino mutazioni a livello di sequenza nucleotidica che non sono dannose perchè avvengono in terza posizione lungo l'ORF (quindi l'amminoacido non cambia). questo è un problema che ho avuto tempo fa, perchè il mio nuovo set di campioni portava una mutazione silente nel sito di attacco dei primers. in questo caso ho risolto disegnando nuovi primers a monte di quelli vecchi.  |
|
|
|
cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 03 marzo 2008 : 15:51:05
|
| Se per esempio i primers vengono conservati diluendoli troppo è possibile che si degradino. Oppure venga usata per ricostituirli un'H2O non RNAse, DNAse free. |
|
|
|
Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 03 marzo 2008 : 16:42:31
|
Citazione:
Messaggio inserito da virgiris
salve a tutti! sono una nuova iscritta, complimenti per il meraviglioso sito! seguo spesso le vostre discussioni sul forum e non potevo che inscrivermi..sopratutto ora che ho bisogno del vostro aiuto.
allora...ho avuto diversi problemi con una pcr..io eseguo estrazioni da code di topo ma una particolare linea murina mi da problemi.
vagliate tutte le ipotesi, controllati i protocolli, etcetcetc volevo chiedere se è possibile che i primer (specifici naturalmente per tale linea) siano degradati o scaduti.. e se è possibile che primer( non so quando ordinati ) scadino o roba simile !
grazie mille
ps: uso primer della ditta primm se puo servire.
Non mi risulta che i primers possono scadere con il tempo, ma sicuramente se non sono corservati a temperatura costante (-20°C) possono subire alterazioni.
Nella mia esperienza la Primm di Milano mi ha sempre dato un po' di problemi in seguito a 4-5 congelamenti e scongelamenti, praticamente devo necessariamente fare delle aliquote per evitare ripetuti cicli di scongelamento->uso->ricongelamento.
Prima utilizzavo i primers di una ditta MWG tedesca che aveva una filiale italiana, con quella ditta potevo congelare e scongelare un sacco di volte senza avere problemi, poi la ditta chiuse e sono passato alla primm con questi problemi.
Riordinali i primers se non sei sicuro di quante vonte siano stati utilizati e soprattutto se sono molto vecchi (>6-8 mesi). |
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 03 marzo 2008 : 17:39:59
|
Citazione:
Messaggio inserito da Neuroscience
Prima utilizzavo i primers di una ditta MWG tedesca che aveva una filiale italiana, con quella ditta potevo congelare e scongelare un sacco di volte senza avere problemi, poi la ditta chiuse e sono passato alla primm con questi problemi.
Neuroscience nel caso ti interessasse io compro i primers della MWG, il rivenditore italiano è MMedical, l'ordine lo faccio on-line sul sito MWG e poi mando un fax alla MMedical per i dettagli per il pagamento e la fatturazione.
In 2-3giorni lavorativi ho i miei primers!  |
|
|
|
Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 03 marzo 2008 : 18:53:06
|
Cara GFPina,
Grazie dell'avviso, però purtroppo da quando è "rinata" la MWG in Italia ho dei problemucci ad ordinare i primers da loro, poiché noi come dipartimento non possiamo pagare le spese di spedizione, o meglio non devono comparire nella fattura. Essendo di origine tedesca loro mi mettono sulla fattura i costi di spedizione, ho provato a chiedere di "omettere" tale dicitura mantenendo costante il totale, la risposta è stata "perché dovremmo fare noi qualcosa di illegale? Non potreste fare voi una eccezione alla regola?". Da lì ho rinunciato ad ordinarli alla MWG sebbene i loro primers sono di migliore qualità.
Dalla Primm (italiana) invece tutto ciò non è un problema, gli oligo costano di meno e faccio qualsiasi tipo di ordine, poi loro fanno una fattura finale comprensiva di tutto... risultato non abbiamo problemi di alcun tipo.
|
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 03 marzo 2008 : 22:54:29
|
Ah beh se ci si scontra con queste "cose" dell'Università...
Io non so come siano le fatture che ci fanno in realtà non le ho mai viste, l'unica cosa che mi avevano detto era che potevo fare un ordine per un tot di oligo, tipo un buono prepagato o qualcosa del genere e poi ordinarli man mano che mi servivano... e forse non c'erano i costi di spedizione... ma non mi ricordo bene! Comunque se ti trovi bene con gli altri e non hai questi problemi meglio!
|
|
|
| |
Discussione |
|
primer pcr
Didattica
