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Patrizio
Moderatore

mago
Cittą: Vancouver


1900 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 13:00:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve ... sapreste dirmi se quando viene indotta l espressione di una proteina con IPTG,la replicazione di E.Coli si ferma o continua? grazie..

( secondo me dovrebbero continuare a replicarsi..ma ho cmq un dubbio )


tommasomoro
Utente Junior



358 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 14:25:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tommasomoro Invia a tommasomoro un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
fare una prova no???

T.
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Patrizio
Moderatore

mago

Cittą: Vancouver


1900 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 16:05:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
..un altra risposta piu' intelligente?

per tommasomoro...forse per non sprecare materiale e tempo?


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GFPina
Moderatore

GFPina

Cittą: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 22:57:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si continuano a replicarsi!!!

@ tommasomoro: magari se qualcuno ha fa una domanda č perché ha bisogno di una conferma per non dover ripetere l'esperimento no???
Non tutti sono in laboratorio a giocare e fare prove...
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Utente Junior



565 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 23:22:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lą Invia a lą un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si continuano a crescere!

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Patrizio
Moderatore

mago

Cittą: Vancouver


1900 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 23:38:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
GFPina non te la prendere con quel poveraccio di tommasomoro se non c arriva...comunque grazie


lą mi dici come fai a confermarmi questo?


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Ayla
Utente Junior

guardiano

Cittą: Wageningen


573 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2008 : 00:21:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ayla Invia a Ayla un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Continuano a crescere e infatti la soluzione diventa pił opaca col tempo, ma crescono fino a un certo punto, nel senso che si arriva a una fase stazionaria per cui la quantitą di mezzo di coltura limita il numero massimo di cellule. (ecco perché se vogliamo che continuino a crescere dobbiamo reinoculare in terreno fresco!)
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Patrizio
Moderatore

mago

Cittą: Vancouver


1900 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2008 : 00:43:19  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si ayla...che non e' che li devo crescere per 3 anni e portarli all asilo ...che una proteina mi devono dare,e volevo sapere se con l IPTG si alterava la replicazione..cmq ho risolto


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Utente Junior



565 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2008 : 13:04:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lą Invia a lą un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
lo so' perchč anche io mi ero posta la stessa domanda 4 anni fa quando ho iniziato a purificare. Mi sono documentata e da nessuna parte ho trovato che l'IPTG va ad alterare la replicazione batterica. Serve solo per l'induzione dell'espressione proteica, ma questo la sai gią.
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tommasomoro
Utente Junior



358 Messaggi

Inserito il - 21 marzo 2008 : 10:07:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tommasomoro Invia a tommasomoro un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
secondo me puo' dipendere dalla proteina che esprimi

e' per questo che si fanno degli expression trials

per ottimizzare la produzione di proteina ricombinante

quindi: "fare un aprova no???"

- quindi continua con lo stesso tempo di duplicazione ?

- qual'e' la percentuale dei batteri che perde il plasmmide di espressione
o in cui avvengono ricombinazione che annullano la overespressione ?

- e la differenza nel tempo di duplicazione fra chi mantiene e chi perde il
plasmide ?

- e i batteri hanno tutti lo stesso numero di copie del plasmide di
espreessione ???

visto che sapete tutto senza provare ????

pensavo di parlare con empirici e non teorici !!!


T.
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Patrizio
Moderatore

mago

Cittą: Vancouver


1900 Messaggi

Inserito il - 22 marzo 2008 : 15:02:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
considerando quanto dura un protocollo di espressione e purificazione della proteina....e visto che in altri momenti se n'e' avuta tanta..io non vedo nessuno scopo di fare tutto questo lavoro,poi lo scopo del forum č appunto chiedere a altri... che magari possono aver avuto gli stessi problemi e aver fatto le prove... e questo evita di ripetarle

per il primo tuo punto..puo' dipendere dalla proteina solo se č tossica per il batterio,o se interferisce con fattori di replicazione


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