Elettroforesi sul gel di DNA

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Klo
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma

107 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 11:34:50

Ciao! E' un p� complicato da spiegare ma spero di essere chiara e che possiate darmi una mano.devo far correre su gel 3 miscele:
1-DNA genomico
2-DNA genomico precedentemente amplificato con PCR
3-DNA plasmidico pUG34
sapreste dirmi quello che dovre vedere per ogni caso una volta terminata l'elettroforesi?
So che per il punto 1 dovrei vedere un'unica banda grande, ma la presenza di una "strisciata" a cosa posso attribuirla?
Grazie mille anticipatamente!

Aureus
Utente Junior

Prov.: Forl�-Cesena
Citt�: Gambettola

123 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 11:53:07

Ciao,
la tua strisciata � nel punto 2?
Se la strisciata � nel secondo pozzetto quasi sicuramente potrei attribuirla ad una PCR non ottimale,
mi spiego meglio...
...a volte le concentrazioni di magnesio cloruro possono influire sulla processivit� della polimerasi.
Prova a cambiare le concentrazioni mM del magnesio cloruro puoi oscillare in un range tra 0.5 a 1.5.
Ciao!
Buona Reaction!

www.tlbspazio.it

Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi

Klo
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma

107 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 12:20:05

Ciao!Grazie per avermi risposto,per� la strisciata � presente sul DNA genomico non amplificato (punto 1).c'� qualche possibilit� che sia dovuta a contaminazione da RNA?
grazie ancora

moonycinzia
Utente Junior

234 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 13:07:15

che io mi ricordi il Dna genomico su gel corre con uno "smear" quando lo tagli con enzimi di restrizione proprio per la grande variet� di frammenti che ottieni.
Nel caso del DNA plasmidico invece otterrai una sola banda corrispondente al suo peso molecolare oppure pi� bande in funzione dei frammenti di restrizione (la cui somma deve darti il peso molecolare del plasmide).
Non so se sono stata chiara
Ciao!!!

Aureus
Utente Junior

Prov.: Forl�-Cesena
Citt�: Gambettola

123 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 13:58:12

Ciao,
� proprio come dice monycinzia,
la strisciata � caratteristica della corsa di DNA genomico!
Ciao!!

www.tlbspazio.it

Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi

Klo
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma

107 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 19:34:34

Grazie mille per le risposte, mi siete stati molto d'aiuto!

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 22:08:48

Il DNA genomico in elettroforesi dovrebbe migrare come un unica grossa banda ad elevato peso molecolare! Se vedi uno smear ("strisciata") (se non hai digerito con enzimi di restrizione!) vuol dire che il DNA � degradato! Cercando con google images ad es. "Genomic DNA electrophoresis" puoi vedere varie foto di gel e farti un idea.

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