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Autore Discussione  

ilarip
Utente Junior

haci
Prov.: Bologna
Città: Bologna


432 Messaggi
Inserito il - 31 marzo 2008 : 17:49:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ilarip  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di ilarip Invia a ilarip un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciaoooo ragazzi
qualcuno ne sa qualcosa????
i lucidi del professore nn sono chiari per niente
ciaooo e grazie
Ho imparato.. .che le opportunità non vanno mai perse.
Quelle che lasci andare tu...le prende qualcun altro
Ho imparato...che è meglio dare consigli solo in due circostanze...
Quando sono richiesti e quando ne dipende la vita.

paolo865
Utente Junior


Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco


262 Messaggi
Inserito il - 31 marzo 2008 : 23:40:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di paolo865 Invia a paolo865 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per il clonaggio di un break point se non sbaglio parti all'inizio utilizzando diverse sonde per fare una FISH su cromosomi metafasici e osservi quale sonda è in grado di ibridare su 3 punti: sul cromosoma parentale normale e sui due derivati. A questo punto la sonda per fish(che sarà almeno di 10 Kb) la vai a clonare in vettori i capienza più piccola in modo da ridurre la dimensione della sonda, e verifichi sempre che queste sonde più piccole ibridino in tre punti. Alla fine dovresti riuscire a clonare il solo frammento di Dna (magari un gene) a livello del quale è avvenuto il break point.
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ilarip
Utente Junior

haci

Prov.: Bologna
Città: Bologna


432 Messaggi
Inserito il - 01 aprile 2008 : 09:55:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ilarip  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di ilarip Invia a ilarip un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille
una cosa però nn ho capito come faccio a clonare la sonda in vettori di capienza più piccola??????
magari la domanda ti sembrerà banale.....
ciaoooooo e grazie ancora
Ho imparato.. .che le opportunità non vanno mai perse.
Quelle che lasci andare tu...le prende qualcun altro
Ho imparato...che è meglio dare consigli solo in due circostanze...
Quando sono richiesti e quando ne dipende la vita.
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Simona84
Utente Junior


Città: milano


131 Messaggi
Inserito il - 07 aprile 2008 : 09:25:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Simona84 Invia a Simona84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
il clonaggio dei breakpoint si fa mediante l'uso di sonde BAC o PAC per anadare a identificare il più accuratamente possibile il punto di rottura del cromosoma e quindi l'origine dell'eventuale cromosoma derivativo. si attuano diversi esperimenti di FISH con diverse sonde, partendo da sonde che mappano in zone distanti dal punto di rottura per avvicinarsi sempre di più a esso.Le sonde vengono scelte au opporuni database e sotto la guida di quanto evidenziato dal bandeggio Q (è il primo passaggio che si fa, ha una bassa risoluzione ma dà un'idea della banda in cui si trova il breakpoint). i segnali non mi risulta che debbano essere tre devi perchè i avrai un chr normale e il derivativo quindi ti aspetti che se la sonda ibrida una regione mantenuta sul derivativo avrai due segnali uno sul chr normale e uno sul derivativo, altrimenti se qquella regione viene persa si avrà solo il segnale sul chr normale e non sul derivativo. i risultati iniziano a essere sufficientemente descrittivi quando la zona di breakpoint è inferiore almeno alle 20.000 bp, ovviamente minore è l'ntervallo migliore sarà la caratterizzazione del breakpoint. spero di essere stata abbastanza chiara!
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ilarip
Utente Junior

haci

Prov.: Bologna
Città: Bologna


432 Messaggi
Inserito il - 07 aprile 2008 : 09:52:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ilarip  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di ilarip Invia a ilarip un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille chiarisima.....
Ho imparato.. .che le opportunità non vanno mai perse.
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