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viola83
Nuovo Arrivato

0602_da_carmilla983
Prov.: Bologna
Città: bologna


12 Messaggi

Inserito il - 01 aprile 2008 : 11:23:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di viola83 Invia a viola83 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando

Ciao a tutti, sono viola ed avrei bisogno di un suggerimento;
è possibile estrarre proteine da biopsie di pochi milligrammi oppure mi conviene aumentare il tessuto in partenza?
Inoltre mi interessa rilevare proteine molto piccole, da 10 kD, so che molti non hanno avuto alcun risultato con questi pesi molecolari, la vostra esperienza mi conferma che sarà difficile rilevarle?
Grazie a tutti!

annamaria_mi
Nuovo Arrivato


Prov.: Milano
Città: milano


18 Messaggi

Inserito il - 01 aprile 2008 : 14:10:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di annamaria_mi Invia a annamaria_mi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
guarda, ora non ricordo con precisione che proteina fosse, ma tempo fa ho avuto a che fare con una proteina sui 10 KDa e nn ho avuto grandi problemi..usa la membrana di PVDF e non la nitro per il trasferimento, che trattiene più facilmente proteine a basso peso molecolare!..per la prima domanda nn saprei aiutarti, mi spiace..
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Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 01 aprile 2008 : 14:20:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
l'unica cosa che puoi fare è vedere quante proteine riesci ad estrarre da pochi mg di biopsia e poi ti regoli con la quantità di tessuto di partenza.


...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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viola83
Nuovo Arrivato

0602_da_carmilla983

Prov.: Bologna
Città: bologna


12 Messaggi

Inserito il - 01 aprile 2008 : 14:27:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di viola83 Invia a viola83 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille per il suggerimento!
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annamaria_mi
Nuovo Arrivato


Prov.: Milano
Città: milano


18 Messaggi

Inserito il - 01 aprile 2008 : 17:23:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di annamaria_mi Invia a annamaria_mi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
dimenticavo..ti conviene anche fare un gel con il running ad una percentuale sul 13% di acril..almeno sei sicura di trattenerla piu facilmente!
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viola83
Nuovo Arrivato

0602_da_carmilla983

Prov.: Bologna
Città: bologna


12 Messaggi

Inserito il - 04 aprile 2008 : 11:13:19  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di viola83 Invia a viola83 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho provato a fare il western, dopo aver estratto e quantificato le proteine (quindi con pochi mg di bx comunque sono riuscita ad ottenere qualcosa), ed ho usato un markers colorato e visibile anche durante la lettura in chemiluminescenza; ho fatto correttamente il passaggio sulla nitro (perchè vedevo il marker colorato), ma quando sono andata a leggere non ho rilevato nulla, nemmeno il marker che a rigor di logica sarebbe dovuto esserci. Cosa puo' essere andato storto? Il secondario?Il substrato?
Aiuto!!
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