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fabbroferraro
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 29 ottobre 2005 : 15:07:32

Ciao a tutti ho un piccolo problema.
Devo estrarre DNA da cellule 3T3 il problema � che devo estrarlo da un campione di 10000 cellule e il metodo che uso di solito (tampone di lisi + fenolo)non � molto sensibile per cos� poche cellule, per cui riesco ad avere solo una efficienza del 17%.
C'� qualcuno di voi che ha disposizione un metodo, con protocollo, pi� sensibile per campioni cos� piccoli?Avete dei protocolli per estrazione di DNA su colonna?se avete metodi alternativi da propormi vi sar� infinitamente grato.

Grazie

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 29 ottobre 2005 : 21:54:48

Puoi provare a usare qualche kit, tipo questo (ci sono anche altre opzioni nel sito):
http://www1.qiagen.com/Products/GenomicDnaStabilizationPurification/QiagenGenomicTipSystem/BloodandCellCultureDNAMiniKit.aspx

Prova anche questo:
http://www.invitrogen.com/content.cfm?pageid=10551
In basso ci sono i kit x il DNA genomico e la tecnologia ChargeSwitch sembra ti possa essere utile (ci sono anche kit x sample forensici, particolarmente poveri o degradati).

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Phoenix
Nuovo Arrivato

Prov.: Milano
Citt�: Bollate

17 Messaggi

Inserito il - 08 novembre 2005 : 10:45:31

Dai un'occhiata a questo link:

http://www1.qiagen.com/literature/protocols/QIAGENGenomicDNA.aspx

A seconda del tipo e del numero di cellule ci sono dei protocolli specifici.

Io uso l' "RNeasy Mini Kit" della Qiagen per l'estrazione dell'RNA.
Non ho esperienza in fatto di DNA, ma guardando i protocolli non mi sembra cos� complicato.

Spero di averti aiutato.

Ciao!

Come la fenice rinasco dalle mie ceneri; amo, quindi vivo.