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annamaria_mi
Nuovo Arrivato


Prov.: Milano
Città: milano


18 Messaggi

Inserito il - 03 aprile 2008 : 16:20:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di annamaria_mi Invia a annamaria_mi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
c'è qlc che usa la beta-tubulina (55 kDa) come controllo di equal loading per proteine citoplasmatiche nei wb?? ho fatto un paio di western ma non esce mai, nemmeno mezza banda..non credo che non sia presente nel tipo cellulare in uso (BV2)..sapete aiutarmi??

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 03 aprile 2008 : 19:10:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Da una "velocissima" ricerca in google beta-tubulina è espressa nelle cellule BV2, ed es. guarda qui!
Penso quindi che il problema sia l'anticorpo, puoi fare altre prove aumentndo la concentrazione dell'anticorpo o... cambiare anticorpo!
Io come loading control uso alfa-tubulina e funziona molto bene, se vuoi ti posso dire qual'è l'anticorpo.

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annamaria_mi
Nuovo Arrivato


Prov.: Milano
Città: milano


18 Messaggi

Inserito il - 04 aprile 2008 : 10:44:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di annamaria_mi Invia a annamaria_mi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie! l'anticorpo è nuovo, appena preso; abbiamo dovuto ordinare la beta perchè l'avevamo bisogno in rabbit (e alfa-tub era quasi sempre in mouse)..quindi nn è nemmeno un problema di anticorpo vecchio o degradato..proverò ad aumentare la concentrazione!speriamo..
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andreone
Nuovo Arrivato



7 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2009 : 12:22:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di andreone Invia a andreone un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se si tratta di anticorpi generici anti alfa oppure anti beta-tubulina non hai necessità di porti il problema:si tratta di una componente del citoscheletro fondamentale ed abbondante in ogni cellula eucariote (sia alfa che beta poichè dimerizzano alfa-beta).
Esistono però anticorpi anti-tubulina specifici per alcuni isotipi che possono essere più o meno espressi a seconda del tessuto analizzato, ed in alcuni casi espressi proprio per nulla.
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gilthanas
Nuovo Arrivato

0116_da_CIA



100 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2009 : 12:29:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di gilthanas Invia a gilthanas un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
alternativamente puoi abbassare la concentrazione del latte, o BSA a seconda di quello che usi, della in cui diluisci l'anticorpo. Non scenderei sotto all'1% però...se già usi questa concentrazione non tiresta che aumentare la quantità di anticorpo
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