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 Problema su denaturazione e colorazione
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AmbienteLife
Utente Junior

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204 Messaggi

Inserito il - 10 maggio 2008 : 12:12:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AmbienteLife Invia a AmbienteLife un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve, ho due domande da porre..... Sto studiando il metodo colorimetrico per il dosaggio, vorrei capire per quale motivo la DFA (difenilammina) è usata per il DNA e l'orcinolo per l'RNA cioè quali sono i legami che si formano, da quello che ho capito è possibile dosare entrambi i tipi di acidi anche se presenti CONTEMPORANEAMENTE in soluzione questo perchè la DFA è specifica per il DNA è l'orcinolo per l'RNA. Un'ultima cosa, per la denaturazione del DNA ed RNA uso il fenolo, ci è stato detto che per il DNA va usato in ambiente acido e per l'RNA in basico per il fatto che il pH influisce sulla DNAasi e sulla RNAasi ma nn ho capito perchè, cioè per quale motivo influenza questi due enzimi?? Help meeeeee grazieeeeee

Guardiamo l'ambiente e rispettiamolo di più... è la nostra casa...

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8380 Messaggi

Inserito il - 10 maggio 2008 : 16:06:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da AmbienteLife

Salve, ho due domande da porre..... Sto studiando il metodo colorimetrico per il dosaggio, vorrei capire per quale motivo la DFA (difenilammina) è usata per il DNA e l'orcinolo per l'RNA cioè quali sono i legami che si formano, da quello che ho capito è possibile dosare entrambi i tipi di acidi anche se presenti CONTEMPORANEAMENTE in soluzione questo perchè la DFA è specifica per il DNA è l'orcinolo per l'RNA.


Rispondo alla prima domanda...
Possono essere dosati anche se sono presenti entrambi in soluzione perchè avvengono due reazioni chimiche diverse.
La distinzione viene fatta in quanto la difenilammina reagisce con il deossiribosio (quindi riconosce solo il DNA) formando un complesso di colore blu, mentre l’orcinolo reagisce con il ribosio (riconosce solo l’RNA) dando una colorazione verde.
L’assorbanza dei due composti colorati viene letta allo spettrofotometro a due diverse lunghezze d’onda: 595 nm. per la difenilammina e 670 nm. per l’orcinolo.

Se vuoi sapere le reazioni specifiche sono queste:
Nel caso della difenilammina, si ha prima una idrolisi chimica del DNA in ambiente acido e il 2-deossiribosio è convertito in aldeide ("w-hydroxylevulinyl aldehyde"), questo composto reagisce con la difenilammina formando il composto celeste.
(da Wikipedia: http://en.wikipedia.org/wiki/DNA_extraction#Detecting_DNA)

L’orniciolo invece reagisce con i pentosi (test di Bial's) deidratandoli e formando "furfurale" che in presenza di tricloruro ferrico e acido cloridrico forma un precipitato verde.
(da Wikipedia: http://en.wikipedia.org/wiki/Bial%27s_Test)

Sul fatto del fenolo e l'estrazione di DNA e RNA non mi pronuncio, ma ci sono discussioni in proposito!

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AmbienteLife
Utente Junior

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Città: Bari


204 Messaggi

Inserito il - 10 maggio 2008 : 16:24:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AmbienteLife Invia a AmbienteLife un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie milleeee :-) la biologia molecolare mi sta affascinando molto e purtroppo i prof. universitari non sempre sono disposti a chiarire i dubbi magari anche sciocchi :-D grazieeee per l'aiuto

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