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 proteine di fusione con la gst
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manumanui
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Inserito il - 27 maggio 2008 : 18:29:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di manumanui Invia a manumanui un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti! è la prima volta che uso questo forum..ho un problema con le proteine di fusione con la gst..purtroppo fino a che ho provato a produrre singoli domini proteici non ho avuto problemi, ora ho clonato dei frammenti più grandi codificanti per parti più grandi di una proteina (e anche per la proteina intera) e sigh si verifica una notevole degradazione...prevalgono, dopo attacco alla resina, frammenti parziali...io ho sempre fatto crescita a 37°C in agitazione fino a OD 0,5, induzione con IPTG 1mM da1h a 4 h...ho provato appunto a diminuire i tempi per vedere se evitavo la degradazione..come cellule ho solo le bl21, che, ripeto, son senpre state ottime per i singoli domini...
potete aiutarmi?
un'ultima cosa..in un lavoro di giapponesi riuscivano a produrre i diversi mutanti, o cmq molto simili...ma non ho proprio tutto questo coraggio per chiedere aiuto a loro :)
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