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Valentina86_
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
 Inserito il - 29 maggio 2008 : 13:36:49
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Ciao a tutti!!!sapreste spiegarmi la differenza tra fusione trascrizionale e fusione traduzionale?
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-VaLeNtiNa- |
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Valentina86_
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2008 : 15:01:19
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qualcuno mi risponde??????????????????????
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-VaLeNtiNa- |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2008 : 16:01:32
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Io non riesco a capire per fusione trascrizionale e traduzionale... |
 
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morgan79
Utente Junior
Prov.: Bari
143 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2008 : 16:25:34
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è la stessa differenza che intercorre tra trascrizione e traduzione, forse ti sfugge il concetto di fusione!
la tua proteina la puoi esprimere come prodotto di fusione con un'altra proteina per diversi scopi: con una coda di istidina per facilitarne la purificazione, con un epitopo (di solito emoagglutinina) per facilitarne l'identificazione mediante blotting qualora non si disponga di un anticorpo specifico per la tua proteina, con una proteina fluorescente,tipo GFP, per esperimenti di localizzazione, o con una proteina batterica qualora la sua overespressione risulti tossica per il batterio, in tutti i casi bisogna amplificarla e clonarla a meno dello stop codon, così che possa essere TRASCRITTA e TRADOTTA come prodotto di fusione con una di quelle sovracitate
a proposito Shuldiner86..... Chuck lives on!!:D |
il sapere non è sufficiente, bisogna applicare; il volere non è sufficiente, bisogna fare |
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Valentina86_
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2008 : 16:56:51
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Io questo l'ho capito,se voglio ad esempio ottenere grandi quantità di una proteina inserisco il cDNA della proteina di interesse in un vettore di espressione a valle di un tag(es. GST) stando attenta a mantenere il frame,poi inserisco il vettore così ingegnerizzato nell'organismo ospite che mi produrrà la mia proteina fusa al prodotto del tag.La potrò facilemte purificare grazie alla presenza del tag e poi posso eliminare il tag e avere la proteina di cui necessitavo.giusto?quindi nella mia mente non ci sarebbe una differenza tra fusione trascrizionale e traduzionale,per ottenere una proteina fusa ad un'altra i passaggi quelli sono,devo modificare il vettore in modo che ci sia trascrizione prima e traduzione poi della proteina fusa.Però la mia professoressa durante le lezioni ha sottolineato che non dobbiamo mai confondere fusione trascrizionale e traduzionale perchè sono due cose diverse e in una slide ha scritto che possiamo fondere un promotore ad un gene reporter come fusione trascrizionale o traduzionale. E io non capiscooooo!!!aiutatemiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiii!!!fatemi un esempio di fusione trascrizionale e uno di traduzionale!!!non è che magari fusione trascrizionale è quando inserisco il cDNA in un plasmide a valle di un promotore per ottenere quella determinata proteina senza che sia fusa ad un'altra e fusione traduzionale è quando inserisco il cDNA a valle di un tag per formare la proteina di fusione???starò sparando una marea di cavolate ma se nn mi aiutate continuerò a spararle in eterno
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-VaLeNtiNa- |
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Valentina86_
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2008 : 17:04:48
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oppure altra idea che mi balena nella mente:fusione trascrizionale quando fondo un gene(quindi DNA e non cDNA) ad un vettore semplicemente per clonarlo e non per esprimerlo, e fusione traduzionale quando uso cDNA in un vettore di espressione per esprimere quella proteina fusa al tag..altra cavolata?? |
-VaLeNtiNa- |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2008 : 17:58:34
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Citazione:
Messaggio inserito da morgan79
a proposito Shuldiner86..... Chuck lives on!!:D
Keep the Metal Faith Alive! 
Comunque io non riesco a trovargli un verso...una proteina di fusoine è una proteina di fusione, come fa ad avvenire una fusione a livello traduzionale? Non capisco quello che intende la tua prof... |
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Valentina86_
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2008 : 18:05:07
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| ma infatti nn la capisco nemmeno io!!!e non mi risponde all'e-mail!se mi dovesse rispondere vi svelerò l'arcano mistero!grazie comunque! |
-VaLeNtiNa- |
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morgan79
Utente Junior
Prov.: Bari
143 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2008 : 18:29:08
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| mi sto scervellando ma i miei neuroni girano a vuoto su sta cosa.... quando la prof ti risponde erudiscici |
il sapere non è sufficiente, bisogna applicare; il volere non è sufficiente, bisogna fare |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2008 : 18:31:46
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Santo Google e santo english...
Citazione:
Transcriptional fusion is a gene construct that investigates transcription activity of a gene of interest. It can be carried on a plasmid vector or integrated into genome. Transcription fusions are made of promoterless reporter genes eg. lacZ or Alkaline phosphatase etc. fused to the sequence surrounding the promoter your gene of interest plus its ribosomal binding sequence. The logic then is that you can assay for expression of your reporter gene, which would be equivalent to expression of your gene of interest. You can avoid all this pain by simply doing quantitative real time PCR. This however does require careful manipulation of RNA, which is not that easy.
The translational fusion is a modification of the transcriptional construct. The translational fusion bears the promoter of your gene and other sequence surrounding it (C-terminal) as well as the N-terminal sequence of your gene. The reporter gene is then inserted between these two terminals and in-frame such that you have one long protein product. This construct supposedly be expressed differently if posttranscriptional modification occurs but I don't buy it too much. You are still assaying, in part, for some transcription with this construct however way you look at it. I think that the difference between transcriptional and translational fusion expression is a more accurate account of what is happening but your are still assuming that your construct has totally no effect on the system.
Praticamente, fusione traslazionale significa inserire a monte di un gene reporter soltanto la sequenza promoter di un gene di interesse, mentre nella fusione traduzionale si clona l'intera seqeunza promoter + gene di interesse in frame con un gene reporter...Detto in parole spicciole... |
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Valentina86_
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2008 : 18:48:10
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dove l'hai trovata questa spiegazione???? |
-VaLeNtiNa- |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2008 : 19:30:40
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| Ho cercato su Google "transcriptional fusion" e il primo risultato era quello di Yahoo Answers... |
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Valentina86_
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 29 settembre 2008 : 13:45:31
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Svelato il mistero!!!La professoressa mi ha risposto all'e-mail e ha scritto
Fusione trascrizionale:un locus genico intero ed autonomo sotto un promotore
Fusione traduzionale:Una ORF intera e parziale da "fondere" con un'altra ORF, così da costituire una nuova unità genica codificante per una proteina chimerica. |
-VaLeNtiNa- |
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Discussione |
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fusione trascrizionale e traduzionale
Didattica
