Forum

Nome Utente:
Password:
Riconoscimi automaticamente
 Tutti i Forum
 Laboratorio
 Biologia Molecolare
 quantificazione mRNA
 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
I seguenti utenti stanno leggendo questo Forum Qui c'è:

Aggiungi Tag Aggiungi i tag

Quanto è utile/interessante questa discussione:

Autore Discussione  

Silvia P.
Nuovo Arrivato

0607_da_carmilla983
Prov.: Padova
Città: Padova


5 Messaggi

Inserito il - 10 giugno 2008 : 17:20:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Silvia P. Invia a Silvia P. un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti, io sto cercando un modo per riuscire a quantificare uno specifico mRNA prodotto in un particolare individuo. Mi spiego meglio: io ho un certo numero di popolazioni di piante dove si ipotizza che ci sia una diversa espressione di un particolare trascritto.. c'è un modo per quantificare questa espressione differenziale?
Grazie a tutti!

Silvia P.

gianpierolandolfi
Nuovo Arrivato



84 Messaggi

Inserito il - 10 giugno 2008 : 17:30:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di gianpierolandolfi Invia a gianpierolandolfi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se vuoi la teoria ho cercato semplicemente su google quantificazione di Rna e ho trovato su wikipedia:

"Due metodi più moderni per misurare la quantità di un singolo mRNA sono la real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) o la reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR), che permettono di quantificare la presenza di un determinato trascritto anche in pochi nanolitri di estratto cellulare. Per tale elevatissima sensibilità la RT-PCR è attualmente la tecnica di elezione, anche se i costi per gli strumenti ed i reagenti possono essere proibitivi.

Oltre a tali metodi, che consentono di quantificare solo poche differenti molecole di mRNA per volta, esistono metodologie che permettono di effettuare screening molto ampi del trascritto complessivo di una cellula. Una di queste metodologie è quella dei DNA microarray che, attraverso l'utilizzo di supporti che contengono migliaia di sonde di DNA complementari ai trascritti della cellula, è in grado di fornire un'analisi contemporanea di migliaia di differenti mRNA."
estratto da http://it.wikipedia.org/wiki/Espressione_genica

se hai bisogno del protocolo allora devi cercare su pubmed.

Se hai bisogno di qualcosa di piu' specifico non e' che lo potresti dire cosi' ti possiamo aiutare meglio...

ciao
Torna all'inizio della Pagina

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 10 giugno 2008 : 17:44:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si il metodo più utilizzato ormai è sicuramente la Real-Time PCR (ovviamente preceduta da RT = retrotrascizione).

Citazione:
Messaggio inserito da gianpierolandolfi

"Due metodi più moderni per misurare la quantità di un singolo mRNA sono la real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) o la reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR), che permettono di quantificare la presenza di un determinato trascritto anche in pochi nanolitri di estratto cellulare. Per tale elevatissima sensibilità la RT-PCR è attualmente la tecnica di elezione, anche se i costi per gli strumenti ed i reagenti possono essere proibitivi.

Fai molta attenzione a questa frase... spesso per RT-PCR si intende Real-Time PCR al posto di Reverse Transcription PCR e questo genera confusione!!!
In realtà per quantificare un trascritto devi prima fare una trascrizione inversa (RT) e poi una PCR che in questo caso deve essere quantitativa! Il metodo più utilizzato di PCR quantitativa è sicuramente la Real-Time PCR, ma è appunto molto costosa, sopratutto se devi comprarti la strumentazione! Esistono però altri tipi di PCR quantitativa o semiquantitativa (come ad es. la PCR-competitiva), se cerchi un po' nel forum trovi delle discussioni al riguardo.
I Microarray sono utili se devi screenare una serie di trascritti, non uno solo!

Ah dimenticavo... Benvenuta sul forum!!!

Torna all'inizio della Pagina
  Discussione  

Quanto è utile/interessante questa discussione:

 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
Vai a:
MolecularLab.it © 2003-18 MolecularLab.it Torna all'inizio della Pagina