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nellybio
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
 Inserito il - 13 giugno 2008 : 14:41:35
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Ciao ragazzi,
sto da un mesetto circa impegnata Gel grandi per il western...ma ho diversi problemi ai quali stiamo cercando di rimediare ma magari con il vostro aiuto si fa prima!!!!
1)Nell'upper,i pozzetti qnd levo i pettinini si distorcono tutti nn esco lineari...qst a volte implica la corsa dei campioni n pò sbilenca altre volte per metterli un pò a posto(lo facciamo cn un puntale)li buchiamo!!!Abbiamo provato a cambiare pettini,i catalizzatori....
2)qnd sviluppiamo alcuni pozzeti vengono sempre + chiari di altri...abbiamo escluso l'incubazione in Ab,l'ECL,e un poroblema di campione...allora cosa sarà??
Se avete qlk idea vi prego...rendetela pubblica...qui stiamo dando di testa:) NO scherzo!!
Kmq grazie molecularlab!!!
Ciauz
Nellybio.
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nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2008 : 15:13:05
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per i pozzetti mi sembra strano..l'unica cosa che mi viene in mente è che il pettine viene estratto in maniera "errata",magari in modo non proprio rettilineo..nel mio lab è successo una volta che venissero male i pozzetti per cause ignote..l'unica spiegazione che ci era venuta in mente era un errore dell'operatore nel preparare la soluz..
ma i pozzetti sono sempre gli stessi che non escono? se sono sempre gli stessi magari è un problema di polimerizzazione..non avete provato con dei gel già pronti a vedere se avete gli stessi problemi?potreste almeno risolvere il problema riguardante lo sviluppo..
un problema di "maneggiamento" della membrana?
un problema dell'apparecchio per lo sviluppo?
boh..al momento non mi viene in mente altro...
fatemi sapere...
ciao ciao |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
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Biotecnologo1987
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: teramo
100 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2008 : 15:17:32
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| ciao....a me viene in mente il tempo di polimerizzazione, oppure il trizma o sd o qlk altro reagente sono andati a male nel senso che sono stati aperti da tempo, oppure ancora le % errate di acryl-bisacryl.... |
Davide* |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 13 giugno 2008 : 23:26:32
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Un paio di considerazioni, magari sono ovvie ma magari no!
1) E' importante lavare bene i pettini ogni volta, magari pulirli con dell'etanolo prima di usarli.
2) Tirali fuori DOPO aver inserito il buffer, non farlo a secco.
3) Quando tiri fuori il pettine prendilo dalle due estremità e cerca di applicare una forza uniforme con entrambe le mani
4) Io generalmente lavavo i pozzetti con una siringa di running buffer prima di caricare il campione. Questo serve per eliminare eventuali pezzettini di poliacrilamide che sono rimasti qui e là.
Se i bordi del pozzetto sono un po' storti non è un dramma, non dovrebbe influenzarti la corsa. L'importante è che i campioni arrivino tutti insieme alla fine dello stacking. |
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 14 giugno 2008 : 00:25:24
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Ho avuto anch'io il problema dei pozzetti quando facevo gel grandi!
(Credo dipenda anche dal tipo di apparato usato: nel mio i pettini erano molto "profondi", anche nella parte superiore ai pozzetti, per cui l� andava ad insediarsi molta acrilammide che rendeva l'estrazione del pettine complicata)
Comunque, oltre a tutti i consigli che ti son stati dati, cerca di sfilare il pettine molto molto molto lentamente. Ogni tanto, finch� lo sfili, prova a scuoterlo un po', in modo da facilitare l'entrata di bolle d'aria e di buffer nel pozzetto. I miei si deformavano perche veniva a crearsi una condizione di vuoto che li risucchiava... |
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