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mendel82
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4 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2008 : 15:26:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mendel82 Invia a mendel82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti, mi sono appena iscritto a questo forum! Spero che qualcuno mi possa aiutare: il mio progetto di dottorato prevede la caratterizzazione di una regione del genoma di un Mycobatterio, comprendente due geni che vengono trascritti in un unico RNA messaggiero, che poi viene processato in due trascritti maturi secondari. Ora io dovrei trovare la ribonucleasi che va a processare questo trascritto; quindi trascrivo la regione, marcatura radioattiva all'estremità, processamento con un estratto proteico grezzo(totale)del mio mycobatterio. Purifico il tutto e faccio correre il mio processato su gel denaturante acril...insieme ad un marker che riproduce esattamente le dimensioni attese del taglio. A questo punto però non vedo un taglio specifico in quella posizione ma altri tagli random, che è normale ottenere, però dovrei ottenere una banda intensa delle dimensioni attese, dovuto appunto al taglio specifico della ribonucleasi. Ho provato varie condizioni: T° di processing, tempo di processing, lunghezza riboprobe; ora ho dubbi se sia buono il buffer che uso per processare o il modo in cui faccio l'estratto (bead-beater). Qualcuno saprebbe indicarmi qualche tecnica, buffer (o santo ) che funzioni, magari se qualcuno ha mai avuto a che fare con questo tipo di progetti,le condizioni ottimali con cui condurre queste prove. Per un cantatto diretto la mia e-mail è: xxxxxxxxxx Grazie mille a quanti risponderanno

atreliu
Amministratore

2970fired

Prov.: Milano
Città: Milano


2484 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2008 : 17:25:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di atreliu  Invia a atreliu un messaggio AOL  Invia a atreliu un messaggio ICQ  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di atreliu  Invia a atreliu un messaggio Yahoo! Invia a atreliu un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao mendel82, ti invito a leggere il regolamento:

Fare cross-posting (inviare lo stesso post in più sezioni), non facilità il lavoro di noi moderatori ed inoltre crea confusione non avendo un posto unico in cui risponderti.

Inoltre non indicare la tua email, sei a rischio SPAM, di sistemi automatici che girano tutto il web.
Una risposta pubblica, qui sul forum, potrà essere di aiuto a quelle persone che si sono ritrovate in un problema simile al tuo.

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