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Discussione |
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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
 Inserito il - 14 luglio 2008 : 14:55:28
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Ciao, devo fare un western con anticorpo anti-ubi e mi hanno detto che devo bollire il filtro? qualcuno di voi l'ha mai fatto e sa darmi delle precisazioni su come farlo? e poi suppongo vada fatto prima dell'incubazione con l'anti.ubi giusto? ciao
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nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 14 luglio 2008 : 18:21:41
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bollire il filtro?ehm..che filtro intendi?e a che serve?magari è mia ignoranza.. |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 09:06:39
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| il filtro di nitrocellulosa su cui fai il transfer delle proteine dal gel.è una cosa nuova anche per me...se qualcuno sa qualcosa mi fa un gran piacere...altrimenti rischierò!! :-) |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 12:18:36
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corri due gel e trasferiscili entrambi poi uno lo blotti normalmente e l'altro provi a bollirlo come ti è stato detto, e vedi come va. comunque neanche io ho mai sentito questa cosa del filtro bollito... |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 14:15:51
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| in letteratura in effetti ho trovato informazioni riguardo la bollitura del filtro prima di incubare con anti-ubiquitina...ma non capisco bene a cosa serve..cmq proverò e vi farò sapere..ciao |
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nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 18:03:30
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aaahhh..io la chiamo membrana... cmq non avevo mai sentito che si potesse o dovesse bollire.. |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 20:52:35
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magari bollire porta fortuna... (scusate la battuta pessima ma certa gente magari è superstiziosa...)  |
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nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 21:33:49
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non ho capito la battua... |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 21:43:10
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Citazione:
Messaggio inserito da nyo84
non ho capito la battua...
magari in quel lab hanno avuto una serie di sfighe e bollendo la membrana dopo gli è venuto l'exp, quindi da quella volta è divenuta prassi bollire il filtro (infatti dicevo che è una battuta veramente pessima) |
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2008 : 23:22:42
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Citazione:
Messaggio inserito da paolo865
in letteratura in effetti ho trovato informazioni riguardo la bollitura del filtro prima di incubare con anti-ubiquitina...
Puoi linkare un articolo...? |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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monera
Utente Junior
Città: stoccolma
421 Messaggi |
Inserito il - 16 luglio 2008 : 11:05:52
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| io so che i filtri vengono sterilizzati tramite autoclave(calore umido),1 atm-121°c...cmq anche bollito non devrebbe esser male... |
Il saggio per eccesso di saggezza diventa un folle agli occhi dei meno saggi
"siamo buoni a nulla, ma capaci di tutto"
J.Morrison |
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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
Inserito il - 16 luglio 2008 : 15:02:24
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per quanto riguarda gli articoli non so come fare a linkarli, ma basta fare una ricerca su google e trovate tra l'altro anche un protocollo della calbiochem specifico per il blot con anti-ubi in cui si specifica il fatto di poter bollire il filtro. cmq per vostra curiosità ieri ho provato a bollire per mezz'ora un filtro ibridato settimana scorsa e non si è distrutto, sebbene, come immaginavo, facendogli dopo il ponceau ho visto che il blocking se ne era ben che andato nell'acqua di COTTURA. cmqverso il fine settimana vi farò sapere com'è andata.
ciao
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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
Inserito il - 18 luglio 2008 : 10:24:19
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| ciao, stamattina ho sviluppato il western della membrana che ieri sera ho bollito per 30 minuti e devo dire che è andato bene, anche se non è differente da quello non bollito....cmq se a qualcuno verrà mai consigliato di bollire un filtro per il western non si spaventi...nn succede nulla...ciao ciao |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 18 luglio 2008 : 11:36:36
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| hai detto che il blocking l'hai cotto durante la bollitura, quindi come hai fatto dopo? hai ribloccato? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
Inserito il - 18 luglio 2008 : 12:01:37
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| il blocking l'ho fatto dopo la bollitura...avevo provato qualche giorno fa a bollire un filtro già bloccato e ibridato con ab primario e secondario...dopo il ponceau però osservavo che il blocking se ne era andato con la bollitura e idem gli anticorpi (non avevo più il segnale sulla lastra che ho provato a sviluppare)....cmq non mi sembra che serva a molto e poi è un protocollo specifico per i western con l'maticorpo anti-ubiquitina. |
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liven
Nuovo Arrivato
Città: Roma
15 Messaggi |
Inserito il - 01 agosto 2008 : 12:51:19
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Ciao Paolo, la bollitura del filtro è generalmente utilizzata come tecnica di "unmasking epitopes", uso il termine inglese perchè rende di più l'idea. Alcune proteine tendono ad una parziale rinaturazione una volta blottate sulla membrana(non chiedermi la chimica-fisica di questo processo)nascondendo in questo modo alcuni epitopi. Se tra questi epitopi "mascherati" c'è anche quello riconosciuto dal tuo Ab, potresti non visualizzare la banda o le bande in westernblot. Anzi potresti creare nuovi epitopi crossreattivi che ti falsano il risultato. La bollitura elimina il problema(almeno in teoria).
Citazione:
Messaggio inserito da paolo865
il blocking l'ho fatto dopo la bollitura...avevo provato qualche giorno fa a bollire un filtro già bloccato e ibridato con ab primario e secondario...dopo il ponceau però osservavo che il blocking se ne era andato con la bollitura e idem gli anticorpi (non avevo più il segnale sulla lastra che ho provato a sviluppare)....cmq non mi sembra che serva a molto e poi è un protocollo specifico per i western con l'maticorpo anti-ubiquitina.
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Liven
"Pillola azzurra, fine della storia: domani ti sveglierai in camera tua e crederai a quello che vorrai. Pillola rossa: resti nel paese delle meraviglie e vedrai quant’ é profonda la tana del bianconiglio…" |
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Bollire filtro?
Didattica e Relazioni
