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JULIO
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83 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2008 : 18:26:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di JULIO Invia a JULIO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Mi rivolgo a tutti le persone che si occupano di colture cellulari su C2C12,vorrei avere uno scambio di informazioni e di confronto sulle modalità di lavoro con questa linea cellulare...vi lascio la mia mail per contattarmi... giuseppe.mazzini@hotmail.it.

la_fra
Utente

betty



750 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2008 : 18:49:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di la_fra  Rispondi Quotando
abbiamo capito che lavori sule c2c12 hai già lasciato 3 post se nessuno ti può dare una mano vuol dire che nel forum nessuno tratta l'argomento abbi pazienza..

Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire)
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JULIO
Nuovo Arrivato



83 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2008 : 18:55:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di JULIO Invia a JULIO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Come sei gentile ed educata,ti ringrazio allora aspetto un tuo aiuto...
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la_fra
Utente

betty



750 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2008 : 21:30:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di la_fra  Rispondi Quotando
io sono educatissima sei tu che non rispetti i regolamenti del forum e posti la stessa cosa in mille salse diverse, non c'è bisogno di far dello sarcasmo
comunque per il differenziamento dai 1occhio su pubmed qui http://www.jhc.org/cgi/rapidpdf/jhc.2008.951228v1 dicono che "Differentiation was induced approximately 24 hours after the cells had reached confluence by adding low-serum containing medium (DMEM; 1g glucose/l), supplemented with 2% horse serum, 1% penicillin-streptomycin (PEST) and 1% glutamine"che sono le stesse concentrazioni che usano qui http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?tool=pubmed&pubmedid=17954612

Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire)
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la_fra
Utente

betty



750 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2008 : 21:36:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di la_fra  Rispondi Quotando
però non lavorandoci direttamente non so dirti di più non hai un'altra aliquota di mioblasti che puoi scongelare e che nn è stata a -50 in modo da vedere se il problema è delle cellule o è dovuto alle condizioni di storage?

Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire)
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JULIO
Nuovo Arrivato



83 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2008 : 23:08:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di JULIO Invia a JULIO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusa ma mi spieghi perchè non hai risposto semplicemente alla mia richiesta invece di montare questa discussione infantile...comunque ti ringrazio!
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frau_frosch
Utente Junior

Mourn

Città: Boston


225 Messaggi

Inserito il - 18 luglio 2008 : 12:36:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di frau_frosch Invia a frau_frosch un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sai cosa...magari si evita di rispondere se un argomento lo si conosce solo per lettura su pubmed...alla fine una ricerca di articoli la posson fare tutti..forse l'avevi fatta anche tu (spero). magari si supponeva che tu avessi bisogno di qualcuno con un po' di esperienza con la linea...
Cmq tutto è bene quel che finisce bene ...la prox volta però posta l'argomento una volta sola così non sorgono altre discussioni
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JULIO
Nuovo Arrivato



83 Messaggi

Inserito il - 21 luglio 2008 : 14:58:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di JULIO Invia a JULIO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho visto da vari protocolli che per la conta delle cellule con la camera di Burker,si utilizzano diverse formule...qualcuno mi potrebbe dire ikl perchè e quale converebbe usare?
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manuela.piazzi
Nuovo Arrivato

barboncino

Prov.: Bologna


8 Messaggi

Inserito il - 23 luglio 2008 : 14:07:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di manuela.piazzi Invia a manuela.piazzi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao! io lavoro con queste cellule da 2 anni, se mi dici cosa ti interessa sapere, vedo se ti posso aiutare!
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JULIO
Nuovo Arrivato



83 Messaggi

Inserito il - 23 luglio 2008 : 23:43:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di JULIO Invia a JULIO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao e grazie per la tua disponibilità. io cercavo soltanto di confrontarmi con altre persone che lavorano con questa linea cellulare,soltanto per avere un altro punto di vista.
Comunque vorrei confrontaremi un po' su tutto.. magari iniziamo con l'uso del DMEM dalla % per la proliferazione a quella che si usa per farle differenziare,con l'aggiunta o no dll'insulina ed in quali quote; al protocollo per la conta cellulare con camera di burker;al protocollo di congelamento ed a quello di scongelamento...poi ti chiedero' il resto

Grazie
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manuela.piazzi
Nuovo Arrivato

barboncino

Prov.: Bologna


8 Messaggi

Inserito il - 24 luglio 2008 : 17:45:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di manuela.piazzi Invia a manuela.piazzi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao!

Le C2C12 si coltivano in DMEM 4.5g/L glucose + 10% FCS

Per quanto riguarda il differenziamento, questa linea può essere indotta in diversi modi a seconda di quello che tu devi studiare: i differenti modi implicano l'attivazione di differenti vie di signaling che però portano al medesimo risultato differenziativo.

Per quello che interessa a me, utilizzo insulina e differenzio le cellule quando sono all'80% di confluenza, con DMEM (sempre alto glucosio, 4.5 g/L) - FCS, a cui aggiungo 100nM insulina

Solo leggendo un po' di letteratura, puoi capire qual è il metodo per te migliore: le C2C12 possono cominciare a differenziare anche solo utilizzando DMEM - FCS!!! c'è chi invece utilizza DMEM + 2% FCS o chi sostituisce l'FCS bovino con quello equino.... probabilmente ci sono anche altri modi che io nn conosco.

Per la conta non ti posso aiutare molto, perchè nn lo faccio più da tempo: le splitto quando sono all'80% di confluenza, 1:10.

Per il congelamento e scongelamento valgono i protocolli classici per le cellule adese, aggiungendo al terreno solito di coltura 10% DMSO.
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JULIO
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83 Messaggi

Inserito il - 25 luglio 2008 : 00:04:49  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di JULIO Invia a JULIO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie per le tante info che mi hai dato...scusa la domanda sciocca ma mi potresti spiegare meglio il significato di splittare 1:10 le c2c12 quando arrivano all'80% di confluenza.
Riguardo l'uso dell'insulina,secondo te potrebbe esssere d'aiuto al differenziamento di cellule che hanno unpo' di difficoltà a diffeenziare?

Ciao e grazie ancora
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manuela.piazzi
Nuovo Arrivato

barboncino

Prov.: Bologna


8 Messaggi

Inserito il - 30 luglio 2008 : 16:02:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di manuela.piazzi Invia a manuela.piazzi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per 80% di confluenza intendo che il totale di cellule che hai seminato in una T175 occupa l'80% dello spazio della fiasca.
A questo punto, le tripsinizzi per staccarle (per esempio con 2 mL di tripsina) e porti a 10 mL con terreno (quindi aggiungi 8 mL).
A questo punto hai un volume finale di 10mL, ne prelevi 1 mL e lo semini in una T175 nuova.
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JULIO
Nuovo Arrivato



83 Messaggi

Inserito il - 19 agosto 2008 : 15:55:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di JULIO Invia a JULIO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
CIAO,
SONO APPENA TORNATO DALLE VACANZE E SI RICOMINCIA....VORREI DA TE UN PARERE SULL'USO DELL'INSULINA PER IL DIFFERENZIAMENTO. SECONDO TE POTREBBE "AIUTARE" I MIOBLASTI A DIFFERENZIARE,SE PRESENTANO UN PROBLEMA?

GRAZIE E A PRESTO
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JULIO
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83 Messaggi

Inserito il - 06 settembre 2008 : 12:30:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di JULIO Invia a JULIO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
VOLEVO PROVARE A METTERE 100nM DI INSULINA PER IL DIFFERENZIAMENTO DELLE C2C12 MA COME DEVO FARE?
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JULIO
Nuovo Arrivato



83 Messaggi

Inserito il - 08 settembre 2008 : 11:43:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di JULIO Invia a JULIO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Dovrei utilizzare il "dapi" per colorare il nucleo delle c21c2,qualcuno poterebbe darmi il protocollo con i vari passaggi?

grazie
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Exilente
Nuovo Arrivato



1 Messaggi

Inserito il - 25 ottobre 2008 : 08:24:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Exilente Invia a Exilente un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Dunque, mi inserisco adesso in questo Forum (forse non nel luogo adatto); tuttavia vorrei sapere se qualcuno ha idea di come sia stata realizzata in origine la camera di Burker.
Cioè al giorno d'oggi non ho difficoltà ad immaginare metodi hi-tech ma in un periodo pre-hi-tech come diavolo facevano?Grazie per l'attenzione
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