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Nova
Nuovo Arrivato
Prov.: NA
Città: Napoli
2 Messaggi |
 Inserito il - 20 luglio 2008 : 20:07:24
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Salve, sono nuova di qui. Vorrei chiedervi dei chiarimenti, e gentilmente potete aiutarmi, visto che tra qualche giornoho l'esame di Biologia Molecolare.
In primo luogo, mi potete spiegare come si effettua l'analisi del saggio CAT? La proffa ha spiegato che si effettua una cromatografia su trato sottile utilizzando un tampone con cloramfenicolo marcato. Ma ciò che mi domando è: come può l'enzima CAT influire sul cloramfenicolo marcato, o comunque, come posso poi io ottenere per autoradiografia una lastra a cinetica con macchie di diversa intensità? Non riesco a ben afferrare la logica dell'esperimento, forse perchè ho preso male quegli appunti in particolare :P
In secondo luogo, sempre come materia d'esame vi sono alcuni protocolli, di cui ci è richiesto sapere i passaggi, senza concentrazioni nè altro, e la logica dietro ciascun passaggio.
Solo che alcuni passaggi mi sono un pochino oscuri. Per esempio riguardo la mini prep, nei miei appunti vi sono passaggi di fenolo+cloroformio per allontanare le proteine, mentre poi nellab abbiamo utilizzato etanolo 90%+70%. Ho pensato fossero due protocolli alternativi, ma non ne ho la certezza, visto che ho trovato su internet solo protocolli con etanolo. E per quanto riguarda la maxi prep, a quanto ho capito si usa bromuro d'etidio per accentuare il gradiente di densità per la ultracentrifugazione, ma, mi chiedo, come fa ad accentuarlo se il dna genomico dovrebbe ormai essere lineare (quindi se svolto dal BrEt si forano superavvolgimenti positivi) mentre quello plasmidico superavvolto dovrebbe addirittura rilasarsi?
Vi chiedo scusa se magari vi sto facendo domande degne della fiera della banalità. Allo stesso modo vi chiedo scusa se vi faccio domande da pippe mentali. Vi ringrazio cmq qualora mi rispondesse.
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Saggio CAT e mini prep
Didattica e Relazioni
