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maia84
Nuovo Arrivato
43 Messaggi |
 Inserito il - 02 gennaio 2006 : 17:04:02
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Ciao qualcuno di voi saprebbe spiegarmi come viene svolto un test di Ames? Inoltre il prof ha parlato di un certo "test CLB"...cos'è?? Ed ora ultima domanda: What's FOOT-PRINTING??...Vi prego colmate la mia ignoranza.... 
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 02 gennaio 2006 : 17:42:29
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Per il Test Clb: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=504
Alle altre due domande rispondo più tardi, ora sono solo di passaggio! |
 
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 03 gennaio 2006 : 00:01:04
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E il foot-printing e' una tecnica che viene usata ad es nei riconoscimenti di paternita' o test simili.
In pratica prendi il DNA genomico e lo digerisci parzialmente enzimi di restrizione o con DNAsi e poi fai correre il tutto su un gel di poliacrilamide.
Quello che ottieni e' una serie di bande caratteristiche di quel certo individuo, cioe' un'impronta genetica (genetic footprint) di quell'individuo. |
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 03 gennaio 2006 : 00:25:36
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Scusa, ma quello non è il finger printing??
Io pensavo che il foot printing fosse una tecnica per vedere se una proteina lega un particolare frammento DNA. In pratica si incuba il DNA con la proteina di interesse.. poi si digerisce il DNA.
Se la proteina lega quel frammento, questo dovrebbe essere protetto dall'azione di DNAsi, per cui la proteina dovrebbe lasciare un IMPRONTA nel DNA.
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 03 gennaio 2006 : 00:29:07
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Ma il foot-printing non serve per visualizzare il legame di proteine al DNA?
Quello che dici tu, mi sembra più che altro un'analisi RFLP.
Footprinting con una nucleasi.
"Il frammento di DNA da esaminare viene marcato ad una estremità (al 5’ o al 3’)
Viene mescolato alla proteina da saggiare (o a un estratto nucleare se la proteina non è stata ancora purificata)
Viene trattato con la DNasiI in condizioni limitanti (bassa temperatura e/o scarse quantità di enzima) in modo che, in media, in ciascuna molecola del frammento di DNA venga rotto un singolo legame fosfodiestere.
Nella intera popolazione di frammenti vengono rotti tutti legami fosfodiestere, tranne quelli protetti dal legame con la proteina.
Viene rimossa la proteina, si esegue una elettroforesi su gel di sequenza (bisogna separare frammenti che differiscono per una sola base) e si visualizzano i frammenti marcati: ciascun frammento porta la marcatura terminale ad una estremità e il sito di taglio con la Dnasi dall’altra.
In un pozzetto adiacente si carica lo stesso frammento sottosposto a digestione con Dnasi, in assenza dell’estratto nucleare (o della proteina). Si ottengono tante bande quante sono le basi del frammento.
Alcune di queste bande sono assenti nella digestione condotta sul frammento in presenza della proteina. La proteina protegge dalla digestione alcuni legami fosfodiesterei impedendo l’accesso alla Dnasi. Le bande che scompaiono corrispondono alla regione impegnata nel legame con la proteina.
Caricando sul gel anche il prodotto del sequenziamento del frammento secondo il metodo di Maxam e Gilbert (che si ottiene marcando terminalmente il frammento) si può conoscere la sequenza della zona protetta." |
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 03 gennaio 2006 : 00:32:04
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| Ah, comunque, per quanto riguarda il test CLB, se vuoi posso anche darti un'immagine che fa capire meglio i vari incroci tra le Drosophile |
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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maia84
Nuovo Arrivato
43 Messaggi |
Inserito il - 03 gennaio 2006 : 11:36:39
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Grazie...ora si che va meglio.. |
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feder
Nuovo Arrivato
Prov.: Perugia
Città: T
85 Messaggi |
Inserito il - 04 gennaio 2006 : 20:13:02
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x quanto riguarda il test di Ames è importante che tu capisca questo:
se metto in un terreno di coltura,contenente solamente alcuni nutrienti Es alcuni Aa si e altri Aa no,un certo batterio con caratteristiche geniche-enzimatiche(metaboliche) incompatibili con la sua crescita in quel terreno (Es non ha geni codificanti x adeguati prodotti e/o enzimi) e invece dopo un po'di tempo noti che nel terreno si sono prodotte colonie di quel batterio allora è successo qualcosa di importante...cioè è avvenuta casualmente una qualche mutazione genica(+ o - favorevole) nel nucleoide(genoma) batterico tale da permetterne la crescita in quel terreno..e tale mutazione evolutiva ha modificato le caratteristiche metaboliche del batterio stesso |
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feder
Nuovo Arrivato
Prov.: Perugia
Città: T
85 Messaggi |
Inserito il - 06 gennaio 2006 : 19:18:02
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invece x quanto riguarda il footprinting è importante sapere essenzialmente questo:
le regioni geniche interagenti con fattori di regolazione(princ trascrizionali Es d'inizio) risulteranno insensibili all'attacco delle nucleasi,una di queste possibili zone geniche sono i promotori e tutto ciò alla fine influisce sulla diversità delle bande ottenute!!di conseguenza si possono cosi avere risposte sulla struttura e funzionalità genica!
è un'estrema sintesi...
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test di mutagenesi
