ESTRAZIONE RNA da MIDOLLO OSSEO

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Autore

Discussione

simmysi
Nuovo Arrivato

Prov.: Bologna
Città: bologna

19 Messaggi

Inserito il - 28 luglio 2008 : 13:26:36

Ciao

vorrei sapere se qualcuno ha esperienza in merito ad estrazioni di RNA
da midollo osseo? posso usare il TRIZOL ? conoscete qualche protocollo ?

grazie in anticipo !

simona

elly_
Utente Junior

400 Messaggi

Inserito il - 28 luglio 2008 : 13:41:41

vedi se uno di questi ti va bene, cmq nel "libretto delle istruzioni" del trizol dovrebbe esserci scritto qualcosa sui vari tessuti da cui vuoi estrarre l'RNA...

http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/1141.html
http://www.pubmedcentral.nih.gov/picrender.fcgi?artid=1769789&blobtype=pdf
http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6W9V-4DYTRY2-3W&_user=451406&_rdoc=1&_fmt=&_orig=search&_sort=d&view=c&_acct=C000021583&_version=1&_urlVersion=0&_userid=451406&md5=7d7f61ea84b9ef3e61268a7c652b2a88

Topogigio77
Nuovo Arrivato

Città: Milano

37 Messaggi

Inserito il - 30 luglio 2008 : 12:38:07

Ciao,
io ti consiglio questo Kit, nasce per il sangue, è perfetto anche per il midollo:
http://www.ambion.com/catalog/CatNum.php?AM1928
spero possa servirti.
ciao

simmysi
Nuovo Arrivato

Prov.: Bologna
Città: bologna

19 Messaggi

Inserito il - 01 settembre 2008 : 18:53:29

grazie a tutti

simona

Angela Cuzzocrea
Nuovo Arrivato

Città: milano

4 Messaggi

Inserito il - 04 settembre 2008 : 09:38:48

Ciao, io ti posso aiutare ho usato per anni il trizol, è facilissimo esegui dettagliatamente quanto è indicato nel foglietto che ti viene consegnato insieme con il prodotto. Ilsegreto per avere la massima efficienza e purezza è quello di lavorare in ghiaccio, cioè il tuo campione di midollo osseo lo devi prettrattare. Si procede così:
il prelievo di midollo è ricco di frustoli, purifica il campione usando una siringa da insulina in modo tale da separare i frustoli dalle cellule, a questo punto sul materiale così purificato esegui un fycoll e non superare i 2000rpm per 20', preleva l'anello di globuli bianchi che conterrà anche le staminali, conta le cellule e per 1 ml di Trizol risospendi NON meno di 5 milioni di cellule. Nota bene che è determinante agitare la provetta dopo che hai risospeso le cellule nel trizol, quindi attenti 10' esatti e congela subito. Quando andrai a riprendere la stessa provetta assicurati che sia perfettamente scongelata lasciandola a temperatura ambiente quindi segui il protocollo. Durante l'estrazione da Trizol RICORDA di lavorare in ghiaccio.ciao ed in bocca al lupo

Topogigio77
Nuovo Arrivato

Città: Milano

37 Messaggi

Inserito il - 04 settembre 2008 : 10:53:42

mitico, grazie Angela per i preziosi suggerimenti
ciao