blackstar82
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Inserito il - 20 agosto 2008 : 15:49:30
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ciao a tutti,mi trovo un pò in dubbio circa i risultati delle rapd pcr che sto avendo e mi chiedevo se qualcuno potesse darmi una mano a proposito. Il problema è il seguente: mi capita spesso che ripetendo la pcr sullo stesso campione, una volta mi dia il profilo di corsa aspettato,la volta seguente, usando lo stesso primer random e lo stesso profilo di amplificazione, in elettroforesi la corsa si fermi alla prima banda significativa che è quella più caratteristica della specie che sto analizzando La foto che allego (mi scuso se è sfocata,ma la fotocamera del lab funziona male) spiega un pò il problema, per capirsi i primi tre campioni dopo il marker sono buoni, e negli ultimi tre prima dell'ultimo marker si verifica il problema che ho cercato di spiegare. A cosa potrebbe essere legato questo comportamento? Ho anche ipotizzato che il primer in maniera del tutto casuale 'privilegi' l'amplificazione della banda più alta e che a volte la reazione si fermi solo a quella... bho sono solo supposizioni non sono una grande esperta di marcatori molecolari, è pochissimo che ci lavoro su.... spero di ottenere qualche opinione chiarificatrice in menrito...
Grazie a Tutti!
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