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mollichina di pane
Utente Junior
121 Messaggi |
 Inserito il - 05 settembre 2008 : 20:28:21
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Aiuto!!!
Mi è accaduta una cosa stranissima...
...ho preparato il loading buffer con questo protocollo:
40% glicerolo,
quanto basta di blu di bromofenolo,
H20 trattata con depc e poi autoclavata,
RISULTATO:
ho avuto una soluzione liquida e soprattutto rossa...
PERCHE?
Qualcuno mi aiuti, non mi era mai capitato!!!
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
 Inserito il - 06 settembre 2008 : 22:34:52
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Beh non è poi così strano... il blu di bromofenolo è "blu" solo nel nome, in realtà è un indicatore di pH che vira da giallo a pH 3,0 a blu/violaceo a pH superiore a 4,6.
Qua trovi dei riferimenti:
Bromophenol blue (Wikipedia)
Indicatore (chimica)(Wikipedia)
In realtà (visto sperimentalmente  ) anche altri fattori fanno virare il suo colore, ad es. il congelamento, io avevo preparato un loading dye per proteine con blu di bromofenolo che era giallo a T amb. e blu se congelato inoltre quando aggiungevo le proteine tornava blu. (c'è un topic in proposito!)
Altre volte mi è capitato di aggiungere altro glicerolo ad un loading dye con blu di bromofenolo che era blu e diventava giallo. L'ho visto assumere varie sfumature tra il giallo, verdognolo, blu e violetto... sinceramente rosso mai, ma non escludo che in certe condizioni possa succedere!
Quello che puoi fare è controllare il pH della tua soluzione, per accertarti che vada bene per i tuoi scopi e magari fare una prova per vedere se la migrazione avviene correttamente, ti basta anche seminare solo il loading dye su gel o se preferisci utilizzarlo con un campione di controllo o con uno standard!
Non escludo che nel momento in cui lo semini nel gel, a contatto con il tampone cambi colore! 
Beh un po' di colore ravviva il labo! 
Altrimenti non ti resta che rifare la soluzione.
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mollichina di pane
Utente Junior
121 Messaggi |
Inserito il - 07 settembre 2008 : 18:51:04
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Grazie GFPina!
effettivamente avevo pensato a qualche scherzetto del pH...
...certo che il rosso mi ha davvero sbalordita.
Ho anche pensato di non aver reso ben omogenea la soluzione 40% di glicerolo...così, magari quest'ultimo potrebbe aver in qualche modo impermeabilizzato le particelle di polvere del blu...
...ad ogni modo rifaro certamente la soluyzione.
Grazie ancora. |
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