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Gzaf
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: Bologna
2 Messaggi |
 Inserito il - 07 settembre 2008 : 20:24:41
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Ciao a tutti, vorrei riportare un fenomeno che ci è successo in laboratorio e sapere se siete d'accordo con la nostra interpretazione.
Stavamo preparando uno stock di soluzione s3 per l'estrazione di dna plasmidico secondo protocollo di non mi ricordo quale ditta (domani quando torno in lab ricontrollo e vi do tutti i dettagli). Ad ogni modo il protocollo era questo:
-2,8M Acetato di Potassio
-pHare a 5.1 con H3PO4 2M (che ci eravamo preparati dallo stock di puro)
In breve, è successo questo: Il KAc si è sciolto benissimo in acqua e non ci sono stati problemi finchè non siamo arrivati circa a pH 5.3 (per inciso, dopo un po' ci siamo accorti che ci sarebbe voluto troppo volume a pHare con H3PO4 2M e abbiamo usato direttamente lo stock puro); a quel punto la soluzione ha cominciato a scaldarsi moderatamente, e un sale bianco è precipitato in grande quantità.
Ragionando con un amico chimico, abbiamo ipotizzato che si trattasse, date le kA degli acidi in gioco, di Potassio diidrogeno fosfato (KH2PO4), che ci risulta abbia una solubilità solo del 33% circa. Facendo una botta di conti molto approssimativa, cioè ammettendo che tutto l'acetato fosse riassociato e tutto il potassio fosse salificato con il fosfato, abbiamo calcolato di essere abbondantemente oltre questa percentuale (verso il 40%).
Vi può parere plausibile la spiegazione?
Grazie mille per qualunque idea!
P.S: Ad ogni modo abbiamo risolto il problema ripreparandoci la soluzione secondo protocollo Qiagen, che prescrive:
- 2.8M KAc
- pHare a 5.5 (non 5.1) con Acido Acetico glaciale.
Non abbiamo avuto nessun problema e l'estrazione è andata benissimo.
Comunque è per curiosità che vorrei capire cosa era successo prima.
Grazie!
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Soluzione S3 x estrazione DNA plasmidico
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