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Autore

Discussione

bioloGa4ever
Nuovo Arrivato

17 Messaggi

Inserito il - 01 ottobre 2008 : 20:06:58

Ciao a tutti!ho un piccolo problemino con le diluizioni,sareste cosi gentili da aiutarmi?
Nel fare un Western blot, per preparare una diluizione 1:5000 del mio anticorpo in una soluzione di PBT (costituito da: PBS alla concentrazione iniziale 5x e concentrazione finale 1x; tween alla concentrazione iniziale 20% e concentrazione finale 0,1% e H20 per portare a volume)quante sono le quantità da prelevare?Come si calcolano?
Ringrazio in anticipo Kisses;)

morgan79
Utente Junior

Prov.: Bari

143 Messaggi

Inserito il - 01 ottobre 2008 : 20:55:37

non ricordo la ricetta dell'incubation buffer per il blot mi sa che il tween al 20% è riferito come concentrazione finale. le quantità sono da riferire alla grandezza del filtro su cui blottare. ti faccio un esempio, la maggiorparte delle volte ho a che fare con un filtro le cui dimensioni entrano in una petri di quelle che si usano per piastrare i batteri, e se non vado errato un volume capace di coprire tutto il filtro in quel supporto è di 20 o 30 ml. ti prepari un falcon di 20 o 30 ml di incubation buffer in cui ci spipetti 4-6 microlitri di anticorpo (il volume del buffer diviso 5000)

il sapere non è sufficiente, bisogna applicare; il volere non è sufficiente, bisogna fare

GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 01 ottobre 2008 : 22:22:49

Citazione:
Messaggio inserito da morgan79

... mi sa che il tween al 20% è riferito come concentrazione finale...

No sarebbe troppo concentrato!!! E' giusto 0,1% come concentrazione finale!

Anyra
Utente Junior

Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara

212 Messaggi

Inserito il - 02 ottobre 2008 : 12:52:06

Devi decidere il volume dell'incubation buffer.
Poi fai i calcoli:

Poniamo un volume di 30 ml

PBS Da 5X a 1X Diluizione 1:5 ---> 30 : 5 6 ml di PBS 5X
Anticorpo 1:5000 ---> 30000 microlitri diviso 5000 (fattore di diluizione) = 6 microlitri di anticorpo
Tween usa la formula C1 X V1 = C2 X V2 ---> 20 X x = 30 X 0.1 cioè 3:20 cioè 0.15 ml

Buon lavoro

PS il vostro capo è tenuto a spiegarvi i fandamenti

Il mio Cavaliere
http://s4.battleknight.it/index.php?loc=hire&ref=OTA3NTAw