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elenadd
Nuovo Arrivato
27 Messaggi |
 Inserito il - 10 giugno 2009 : 17:35:24
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ciao a tutti!!...volevo chiedervi, per fare topi transgenici, se faccio ricombinazione omologa in un introne che effetti avrò sul fenotipo? e sa la faccio su un esone?? ...grazieeee 
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darkene
Utente Junior
291 Messaggi |
Inserito il - 11 giugno 2009 : 18:34:58
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non ho ben capito cosa intendi.
se parli di "fare ricombinazione omologa in un introne", cioè che la zona di omologia tra genomico e vettore sia un introne o un esone, allora non dovrebbero esserci effetti, dato che le due sequenze si scambieranno ma essendo omologhe riavrai la sequenza wt.
se invece intendi che è l'introne o l'esone che viene "modificato", cioè deleto, mutato ecc, allora c'è differenza. di solito si "colpisce" uno o più esoni, dato che rappresentano la parte codificante. in teoria colpire un introne non dovrebbe avere effetti fenotipici, se non per la presenza di regioni regolative quali promotori criptici, esoni alternativi non descritti, microRNA, ecc.
tieni comunque conto che per qualsiasi strategia di ricombinazione, non è detto che tu abbia per forza un fenotipo. molto dipende da fattori vari che possono essere la presenza di geni ridondanti nell'animale target, fattori epigenetici, strain utilizzato, ed altro.
solo una precisazione di forma.
tu stai parlando di "topi ricombinanti" (knock-out, knock-in)
i "topi transgenici" non si ottengono per ricombinazione omologa, ma per inserimento nell'oocita di un transgene (con un promotore) che non avendo sequenze per la ricombinazione può inserirsi a caso nel genoma e non avere la regolazione fisiologica.
spero di esserti stato utile! |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 11 giugno 2009 : 19:45:43
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Citazione:
Messaggio inserito da darkene
solo una precisazione di forma.
tu stai parlando di "topi ricombinanti" (knock-out, knock-in)
i "topi transgenici" non si ottengono per ricombinazione omologa, ma per inserimento nell'oocita di un transgene (con un promotore) che non avendo sequenze per la ricombinazione può inserirsi a caso nel genoma e non avere la regolazione fisiologica.
No di "topi transgenici", che possono essere ottenuti anche per ricombinazione omologa!
Giusto per informazione, questa discussione deriva da quest'altra: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=13381
dove era già stata spiegata la differenza tra knock-out/knock-in e "topi transgenici".
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elenadd
Nuovo Arrivato
27 Messaggi |
Inserito il - 12 giugno 2009 : 00:13:56
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mi riferivo proprio al fatto che è l introne o l esone ad essere modificato...sisi sei stato utilissimo grazie anche a te GFPina  |
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