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Bian Que
Nuovo Arrivato
99 Messaggi |
 Inserito il - 09 settembre 2010 : 00:29:24
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Salve a tutti, sono alle prese con lo studio dei topi Ko: il funzionamento della pcr per la verifica dell' effettiva integrazione del costrutto che andrà' a sostituire il gene l' ho capito, ma il southern blot mi è poco chiaro ( ho gli appunti molto confusi su questo aspetto e il Gene non lo nomina nemmeno). Qualcuno puo' spiegarmi i vari passaggi di quello che accade quando si effettua questa tecnica in relazione ai topi Ko ?
Grazie mille :)
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Bian Que
Nuovo Arrivato
99 Messaggi |
Inserito il - 10 settembre 2010 : 21:27:33
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Nessuno puo' aiutarmi ?   |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 10 settembre 2010 : 23:10:18
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il southern blot consiste nel tagliare il DNA genomico in frammenti (tramite uso di enzimi di restrizione) e pi rivelare il frammento che ti interessa (per esempio, un frammento del gene tal dei tali) tramite una sonda specifica (complementare) marcata in genere radioattivamente.
Questo frammento, naturalmente, avrà un determinato peso molecolare.
Diciamo, tanto per fare un esempio, che digerendo il tuo DNA genomico W.T. con EcoRI ottieni un frammento del tuo gene X che corre su gel a 3000 bp. Diciamo anche che questo frammento contiene un esone (o parte di esso), che viene eliminato nel topo K.O. (sostituendo questo esone con un frammento per esempio di 1200 b.p.) In tal modo potrai discriminare topi k.o. da topi w.t. semplicemente ibridando il frammento con la sonda specifica, e guardare a che altezza ti migrano i frammenti. Il topo w.t. avrà una banda a 3000 bp, l'eterozigote una a 1200 e una a 3000, il k.o. solo la banda a 1200.
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Southern Blot per topi KO
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