bloccaggio western blot

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Autore

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giulella
Nuovo Arrivato

38 Messaggi

Inserito il - 26 novembre 2010 : 15:06:56

Cari colleghi,

pensate che ci sia una correlazione tra concentrazione di latte e tempo di incubazione per il bloccaggio?
Di solito io uso il 5% di latte per 2h30'a RT. Pensate che se riduco il tempo di incubazione dovrei incrementare la concentrazione di latte e viceversa?

Grazie mille

_pietro_
Nuovo Arrivato

Citt�: Lund

104 Messaggi

Inserito il - 26 novembre 2010 : 16:41:31

Io blocco per solo 2h alle tue stesse condizioni. E sono anche abbastanza sicuro che se dovessi ridurre ulteriormente non cambierebbe molto...

Daria85
Utente

678 Messaggi

Inserito il - 26 novembre 2010 : 20:52:13

quoto Pietro!
io faccio in 2 modi: o blocco 2h RT o o.n. a 4�C, ovviamente mantenendo sempre il latte al 5%.

baci

Iside
Utente Attivo

Citt�: Napoli

1375 Messaggi

Inserito il - 27 novembre 2010 : 14:25:06

io in genere blocco in bsa o in milk per 45'...se non ho tempo di proseguire lascio il blocco ON a 4�C

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...

Martin.diagnostica
Utente Attivo

1582 Messaggi

Inserito il - 27 novembre 2010 : 19:08:01

Se la lastra ti viene sporca non prendertela con il latte, se aumenti la conc. ci puoi fare una zuppa o un cappuccio nulla di pi� !!!

Prova a diluire l'ab1 o l'ab2, o a caricare meno proteina. Pu� accadere anche se corri il gel troppo forte (si riscalda la cameretta) potresti fare la corsa e il blot in camera fredda. Moto spesso � dovuto ad anticorpi scadenti

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 27 novembre 2010 : 19:45:00

Dubito che la concentrazione abbia un effetto (almeno sopra un certo limite). Sicuramente sei ben oltre il limite di saturazione.

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