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cicileus
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2 Messaggi

Inserito il - 18 gennaio 2011 : 23:06:40

Ciao a tutti sto svolgendo la mia tesi sull'espressione delle proteine E6 E7 del papillomavirus. Per valutare l'effettiva presenza delle proteine devo svolgere un western blot, e fin qui tutto normale, solo che io parto da un numero di cellule abbastanza esiguo e variabile in quanto sono campioni prelevati da pazienti con il citobrush (sto svolgendo la tesi in ospedale). La mia domanda è quanto è sensibile il western? mi permetterà di vedere le proteine anche da pochissime cellule?
Grazie 1000

Daria85
Utente

678 Messaggi

Inserito il - 19 gennaio 2011 : 00:05:21

tutto dipende dalla concentrazione dei lisati che ottieni... questo perkè ad es. se fai un gel piccolo, la concentrazione ideale per avere belle bande è 25ug\ul(xkè nel pozzetto puoi caricare al max all'incirca 25ul.
Questo implica ke dai tuoi campioni devi ottenere una concentrazione adeguata. Nel tuo caso, in ccuardi delle proteine virali, credo ke molto dipenda dalla carica virale del campione.
non hai pensato in alternativa di utilizzare l' ELISA che è molto più sensibile del WB?
baci

cicileus
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 19 gennaio 2011 : 18:27:18

Il problema che facendo la tesi in ospedale non ho a disposizione i macchinari necessari per fare un ELISA... in realtà non c'è nemmeno il kit per il WB che dovrebbe arrivare... Cmq grazie mille