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Discussione

napo
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 24 gennaio 2012 : 22:24:45

Ciao a tutti, ho sentito parlare di questa tecnica ma non la conosco, qualcuno può spiegarmi di che si tratta? grazie in anticipo

PieroOnorati
Nuovo Arrivato

Prov.: LT
Città: Latina

2 Messaggi

Inserito il - 05 marzo 2014 : 15:45:04

E' un metodo di quantifica del DNA che utilizza la PCR. Il concetto base è quello di distribuire piccolissime porzioni di campione (1-2 molecole di DNA) in celle di dimensioni nell'ordine dei micrometri. In ogni cella viene fatta avvenire la reazione di PCR con sonde fluorescenti (come nella real-time) e solo alla fine della reazione si va a misurare la fluorescenza ottenuta (è una procedura end-point). In pratica si vede dove c'è stata reazione di PCR (positivo, cella piena) rispetto a dove non è avvenuta (negativo, cella vuota) ed i risultati vengono sottoposti ad un calcolo di distribuzione statistica (distribuzione di Poisson), risalendo in questo modo al numero di molecole di DNA target che avevo nel mio campione iniziale. Ci sono sostanzialmente due metodi pratici per effettuare una digital PCR al momento: 1) Si usano come celle di reazione migliaia di goccioline di uno specifico fluido di immersione in cui avviene la PCR che vengono analizzate dallo strumento; 2) Si piastra il campione su un piccolo chip contenente migliaia di pozzetti nei quali avviane la PCR e poi si analizzano. Spero di essere stato il più chiaro possibile e di poter essere d'aiuto per chiunque legga.