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illumina
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
 Inserito il - 05 luglio 2012 : 15:12:37
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Salve a tutti!
Sto lavorando con la tecnica Western Blot ed ho un problema di cui il motivo non riesco a capire.
Praticamente, faccio un Western, sviluppo e ottengo i risultati, e poi ripeto la procedura di Western con gli STESSI reagenti, campioni, o addirittura, per l'actina IL GIORNO DOPO, e ottengo le lastre completamente bianche, neanche uno spot (luminolo è ok, provato anche i kit per la relevazione del segnale estremamente sensibili -la stessa cosa)
A qualcuno di voi è capitato? Sapete il motivo? Stavo pensando addirittura alla temperatura in laboratorio che può variare un pò con l'aria condizionata.....
Aspetto le vostre opinioni.
Grazie
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Ababy
Nuovo Arrivato
14 Messaggi |
 Inserito il - 14 maggio 2013 : 10:45:59
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Ciao!
Da qualche settimana capita anche a noi in laboratorio! Ci stiamo scervellando ma non abbiamo trovato una spiegazione ed è abbastanza seccante.
Anch'io avevo pensato alla temperatura in laboratorio ma su cosa potrebbe influire?
Scommetto che quando hai fatto il ponceau dopo il transfer era venuto normale e non c'era nessun presagio che non desse segnali...
Vedo che il tuo post è vecchio, vi è ricapitato? |
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_ARY_
Nuovo Arrivato
Prov.: mi
Città: milano
81 Messaggi |
Inserito il - 16 maggio 2013 : 11:44:01
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ciao,
a me è capitato per 2 volte di fila, ma eravamo assolutamente certi che la proteina doveva esserci.
Quindi ho fatto 2 gel caricando le stesse quantità e poi una nitro l'ho saturata in 5% latte-tbs tween 0,1% e nello stesso mezzo ho preparato gli anticorpi; mentre l'altra nitro l'ho saturata con 5%bsa-tbs tween 0,1% .
in un caso ho avuto la lastra assolutamente bianca e nell'altro caso ho avuto del segnale.
Provate magari non cambia nulla nel vostro caso..ma tentar non nuoce.
dovremmo scrivere un libro in merito ai misteri de WB.
in bocca al lupo :)
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Western blot - lastre bianche
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