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roselady
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
119 Messaggi |
 Inserito il - 05 febbraio 2013 : 19:50:44
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Ciao a tutti :)
Avrei una domanda da porvi riguardo un certo calcolo!
Ho caricato dei campioni su un gel per fare un SDS PAGE .
Oltre ai miei campioni ho caricato anche uno "standard" a diverse concentrazioni,ovvero pari a 5-10-20 ng .(Lo standard in questione mi serve per vedere se la proteina che io cerco c'è e per quantizzarla )
Questo standard è concentrato 400 ng/microlitro ed è stato diluito 1:20 in un volume finale di 40 microlitri ,quindi 38 microlitri di acqua + 2 microlitri di questo standard.
La dottoranda ha caricato 4 microlitri di standard per caricare 5 ng, 8 microlitri di standard per rispettare la concentrazione di 10 ng e 16 microlitri per 20 ng .
Quando ho rivisto i calcoli ho scoperto di non trovarmi , io dividerei i ng per la concentrazione in ng/microlitro,cioè:
5ng da caricare sul gel-----> 5 ng/ 400ng/microlitro = 0,0125 microlitri, e ovviamente non mi trovo xD c'entra la diluizione credo,che devo considerare ... ma in tal caso come si procede? :(
Grazie mille e scusatemi per questi dubbi che ho,che saranno scemissimi :/
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 05 febbraio 2013 : 20:34:55
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Manca qualche passaggio evidentemente, magari l'aggiunta di un loading buffer allo standard da caricare.
La concentrazione dello standard diluito 1:20 è ovviamente 20 ng/uL, di questa concentrazione devi tenere conto, non di quella dello stock. Sbagliato perciò il calcolo 5/400, eventualmente 5/20, che dà come risultato, però, un volume davvero troppo piccolo da caricare.
Piccolo appunto: nonostante molti sembrino non dar peso alla rigorosità terminologica, professori colpevolmente inclusi, il vocabolo quantizzare fa riferimento alla fisica quantistica, totalmente inappropriato, dunque, il uso in questo contesto. Ciò che stai facendo è una quantificazione, dal verbo quantificare. |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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roselady
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
119 Messaggi |
 Inserito il - 06 febbraio 2013 : 12:48:56
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 Scritto da MolecularLab Mobile
ora ti dico lei cosa ha messo in ogni campione da caricare sul gel:
per lo standard 5ng : 4 microlitri di standard + 2,5 di loading buffer 4x + 3,5 microlitri di acqua...
per quello a 10 ng : 8 microlitri di standard ,4 microlitri di lb e 3,2 di acqua... e per quello a 20 ng 16 di standard etc.
i calcoli fatti per loading buffer e acqua sono approssimati a quanto ho capito peró mo preme di piú sapere come abbia fatto ad ottenere qurl risultato di 4 microlitri...
ti ringrazio per la correzione che hai fatto :-) in effetti qui in molti adottano questo termine "quantizzare" , ma hai ragione :-)
per quanto riguarda questo mio dubbio tu sapresti dirmi come si potrebbe fare ora che ti ho dato questi valori? o qualcun altro lo sa fare? |
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roselady
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
119 Messaggi |
Inserito il - 06 febbraio 2013 : 19:56:52
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| Ho risolto la questione,è lei che ha sbagliato tutto! grazie mille per la disponibilità :) |
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