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Autore

Discussione

valeriamassa
Nuovo Arrivato

Prov.: Milano
Citt�: milano

64 Messaggi

Inserito il - 23 luglio 2007 : 14:16:11

Devo clonare il mio gene in un vettore virale: ho inserito negli oligo i siti di restrizione per due diversi enzimi, per� un enzima crea estremit� piatte e l'altro estremit� coesive,qualcuno sa dirmi se avr� problemi al momento della ligazione??

valeria

Aureus
Utente Junior

Prov.: Forl�-Cesena
Citt�: Gambettola

123 Messaggi

Inserito il - 23 luglio 2007 : 15:47:12

Ciao,

la specificit� aumenta con le estremit� "stiky" di due enzimi che magari tagliano in modo diverso...
...comunque ci sono ligazioni pi� difficili di quella che hai scelto tu..
... il mio consiglio � quello di provare!

http://didattica.cribi.unipd.it/ingegenet/06Lucidi4x.pdf

www.tlbspazio.it

Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi

LUCIA14976
Nuovo Arrivato

20 Messaggi

Inserito il - 23 luglio 2007 : 20:51:59

non credo che dar� particolari problemi basta digerire il vettore con gli stessi enzimi. i clonaggi blunt sono un po' pi� delicati e richiedono pi� tempo, quindi io per i tempi e per le modalit� di ligasi considererei entrambi blunt, ciao

mikimix
Nuovo Arrivato

Prov.: Matera
Citt�: Marconia

17 Messaggi

Inserito il - 10 agosto 2007 : 10:32:51

Caio a mio parere anche se non ho una grande esperienza pratica � molto pi� facile che la ligazione avvenga con delle estremit� protuting,magari scegli un altro enzima di restrizione,anche se in questo coso una delle due estremit� dovrebbe legarsi facilmente riducendo i rischi di ricircolarizazione.

Cangrande
Utente Junior

Prov.: Verona

280 Messaggi

Inserito il - 10 agosto 2007 : 14:39:27

A livello teorico non dovresti aver problemi. Anch'io ti consiglio di provare.

Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala.

l�
Utente Junior

565 Messaggi

Inserito il - 11 agosto 2007 : 11:16:45

ciao! penso che se digerisci il vettore e la parte del DNA da clonare con i medesimi enzimi non dovresti avere probleni con la ligazione. Se no usa altri enzimi che diano entrambi le stesse estremit�.
Comunque ripeto non dovresti avere problemi in linea di massima.