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gtca
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15 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2014 : 18:02:44  Mostra Profilo Invia a gtca un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Durante il processo di ligazione, se si vuole aumentare la probabilità che il frammento si leghi con i vettore è consigliato, con un enzima fosfatasi,eliminare il P al 5' nel vettore, in modo che questo non si richiuda su se stesso.
Mi chiedo però, mancando il P al 5', come possa quindi il frammento legarsi al vettore...
Come fa?

Grazie, (sperando che prima o poi qualcuno risponda... :) )

Geeko
Utente

Ctenophor1.0

Città: Milano


1042 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2014 : 18:56:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Penso proprio che le due molecole di DNA vengano ligate mediante il 5' fosfato derivante dall'inserto. Così rimane però un nick in corrispondenza del sito di ligazione nell'altro strand dato dalla mancanza dal 5' fosfato del vettore. Di fatti però inserto e vettore sono ora un'unica molecola e i nick verranno riparati una volta che le cellule batteriche verranno trasformate con il prodotto di ligazione.


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